一种固定化酶法催化合成没食子酸丙酯的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111763626A(43)申请公布日2020.10.13(21)申请号202010535954.8C12R1/685(2006.01)(22)申请日2020.06.12(71)申请人遵义市倍缘化工有限责任公司地址563115贵州省遵义市汇川区沙湾镇沙湾村（原3655厂）(72)发明人张基明杨长满张洪滔胡敬黄泽琦周婷婷(74)专利代理机构贵州派腾知识产权代理有限公司52114代理人周黎亚(51)Int.Cl.C12N1/14(2006.01)C12N9/18(2006.01)C12N11/14(2006.01)C12P7/62(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种固定化酶法催化合成没食子酸丙酯的方法(57)摘要本发明公开了一种固定化酶法催化合成没食子酸丙酯的方法，括以下步骤：(1)产酶菌筛选；(2)单宁酶生产；(3)酶固定：取石墨烯粉，经改性处理后，制得改性石墨烯粉；将改性石墨烯粉加蒸馏水，超声分散均匀，制成石墨烯悬浮液；向石墨烯悬浮液中加入单宁酶，搅拌处理，制得固定化酶；(4)溶剂处理：将固定化酶添加到有机溶剂苯中，并加入激活剂，搅拌均匀后，立即加入没食子酸和正丙醇，加热，保温，搅拌反应8‑10h后，超声处理15‑20min，继续搅拌反应7‑8h，过滤，获得石墨烯滤渣和滤液；(5)反应后处理。本发明提供的方法，酯化反应时间短，没食子酸丙酯的收率较高，解决了现有技术中反应时间长、收率偏低的问题。CN111763626ACN111763626A权利要求书1/1页1.一种固定化酶法催化合成没食子酸丙酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)产酶菌筛选：将黑曲霉菌接种到筛选培养基，在28-30℃下培养6天，挑选出长势好的黑曲霉孢子；(2)单宁酶生产：将挑选的黑曲霉孢子，接种到生产培养基中培养，在在28-30℃下培养3天，将获得培养液按照常规技术经过滤、分离、葡萄糖凝胶色层析、真空冷冻干燥处理，制得单宁酶；(3)酶固定：取石墨烯粉，经改性处理后，制得改性石墨烯粉；将改性石墨烯粉加蒸馏水，超声分散均匀，制成石墨烯悬浮液；向石墨烯悬浮液中加入单宁酶，在40℃下搅拌处理40-50min，真空冷冻干燥制得固定化酶；(4)酯化反应：将固定化酶添加到有机溶剂苯中，并加入激活剂，搅拌均匀后，立即加入没食子酸和正丙醇，加温至40℃，保温，搅拌反应8-10h后，超声处理15-20min，继续搅拌反应7-8h，过滤，获得石墨烯滤渣和滤液；(5)反应后处理：石墨烯滤渣回充分重复使用；滤液按照常规方法进行回收有机溶剂苯、干燥处理，制得没食子酸丙酯。2.如权利要求1所述的固定化酶催化合成没食子酸丙酯的方法，其特征在于，所述筛选培养基、生产培养基的组成为：5g/L单宁酸、15g/L葡萄糖、0.5g/LMgCl2、0.5g/LK2HPO4、0.6g/LNaNO3、0.02g/LFeSO4；黑曲霉菌、黑曲霉孢子均是按照5％接种量接种。3.如权利要求1所述的固定化酶催化合成没食子酸丙酯的方法，其特征在于，所述石墨烯粉的改性处理为：将石墨细粉放入其质量10倍的浓硫酸溶液中，在60-70℃下回流改性2h，冷却后，过滤后，水冲洗净石墨烯表面的浓硫酸，干燥，制得氧化石墨烯；再将氧化石墨加入等质量的水中，加入氧化石墨烯质量3％的聚丙烯酰胺，再加入聚丙烯酰胺质量5％的硫酸铵，在85℃下反应4h，过滤，洗涤，干燥，制得改性石墨烯。4.如权利要求1所述的固定化酶催化合成没食子酸丙酯的方法，其特征在于，所述步骤(3)，石墨烯悬浮液的浓度为1g/ml，单宁酶的添加量为石墨烯质量的4倍。5.如权利要求1所述的固定化酶催化合成没食子酸丙酯的方法，其特征在于，所述步骤(4)，激活剂为硫酸镁，添加量为固定酶质量的0.1-0.2％。6.如权利要求1所述的固定化酶催化合成没食子酸丙酯的方法，其特征在于，所述步骤(4)，每升有机溶剂苯中加入0.05-0.1L的正丙醇、5-10mol的没食子酸、60-100g的固定酶。7.如权利要求1所述的固定化酶催化合成没食子酸丙酯的方法，其特征在于，所述步骤(4)，搅拌反应的速度为150-200r/min。8.如权利要求1所述的固定化酶催化合成没食子酸丙酯的方法，其特征在于，所述步骤(4)，超声处理的功率为40W。2CN111763626A说明书1/5页一种固定化酶法催化合成没食子酸丙酯的方法技术领域[0001]本发明属于抗氧化剂制备技术领域，尤其涉及一种固定化酶法催化合成没食子酸丙酯的方法。背景技术[0002]没食子酸丙酯(Propylgallate，简称PG)为白色至浅褐色结晶粉末或微乳白色针状结晶，化学名称为3，4，5-三羟基苯甲酸丙酯，具有良好的抗氧性能，抗