一种利用牛胆汁高效酶提取胆汁酸的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112322684A(43)申请公布日2021.02.05(21)申请号202011242296.X(22)申请日2020.11.09(71)申请人湖南夏盛酶技术有限公司地址415400湖南省常德市津市市高新区胥家湖路以南(72)发明人李康乐沈涛杜新园程伟(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465代理人崔自京(51)Int.Cl.C12P33/00(2006.01)C07J9/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种利用牛胆汁高效酶提取胆汁酸的方法(57)摘要本发明公开了一种利用牛胆汁高效酶提取胆汁酸的方法。属于动物胆汁有效萃取技术领域。包括以下步骤：将原料、复合酶制剂混合，调节pH、酶解并搅拌调节后，固液分离得提取液；灭酶，加入胆盐水解酶酶解，再调节pH并升温，搅拌皂化，离心，并调节pH值，得上清液；加入双氧水，搅拌混合均匀后，室温下反应完毕后，过滤得处理液；缓慢加入醋酸丁酯并搅拌，然后调节溶液pH，固液分离，得到固形物；离心，水洗，再干燥至水分不高于1％，即得胆汁酸提取物成品。本发明采用酶制剂进行提取，提高产品纯度，降低杂质，提高产品收率，从根本上避免有毒物质参与而带来的污染，降低强酸强碱带来的环境污染问题，而且工艺简单、投资少、成本低。CN112322684ACN112322684A权利要求书1/1页1.一种利用牛胆汁高效酶提取胆汁酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将原料、复合酶制剂混合，调节pH、酶解并搅拌调节后，固液分离得提取液；(2)对提取液灭酶，加入胆盐水解酶酶解，再调节pH并升温，搅拌皂化，离心，并调节pH值，得上清液；(3)将上清液加入双氧水，搅拌混合均匀后，室温下反应完毕后，过滤得处理液；(4)向处理液中缓慢加入醋酸丁酯并搅拌，然后调节溶液pH，固液分离，得到固形物；(5)将固形物离心，水洗，再干燥至水分不高于1％，即得胆汁酸提取物成品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述原料为新鲜牛胆汁，或者为胆膏和水的混合物，其中胆膏和水的质量比为1:(5～9)。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述复合酶制剂包括以下质量分数的成分：碱性蛋白酶20～35％、中性蛋白酶10～20％、酸性蛋白酶5～10％、风味蛋白酶5～10％、脂肪酶1～5％、磷脂酶1～5％、甘油5％、聚乙二醇5％和水5～48％。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)以原料质量计，复合酶制剂添加量的质量占比为0.01～0.1％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述调节pH至5.0～9.0；所述酶解的温度为30～50℃，酶解时间为30～120min；所述搅拌转速为100～150rpm。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述灭酶为80～100℃灭酶时间30～60min。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)以所述提取液重量计加入的胆盐水解酶质量占比为0.1％-1.0％。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述酶解：调节pH至3.0～8.0，温度为30～50℃；所述再调节pH调节至9～11；所述升温至100℃；所述并调节pH至7～10；所述搅拌皂化的时间为1～3小时。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)上清液和双氧水的质量体积比为10：(1～5)kg/L。10.权利要求1～9任一所述方法制备得到的胆汁酸成品。2CN112322684A说明书1/5页一种利用牛胆汁高效酶提取胆汁酸的方法技术领域[0001]本发明涉及动物胆汁有效萃取技术领域，更具体的说是涉及一种利用牛胆汁高效酶提取胆汁酸的方法。背景技术[0002]牛胆汁为牛科动物黄牛或水牛的胆汁，鲜胆汁色泽呈绿褐色或暗褐色微透明，略粘、腥臭、味苦等特点，是提取CA和DCA的主要原料之一。胆汁是一种多种成分的混合物，除有大量水份外，主要含有胆汁酸、胆色素、胆固醇、脂肪酸、卵磷脂、常量和微量元素以及维生素、氨基酸、无机盐离子等，与体液类似；此外，也含尿素、嘌呤等代谢产物和甲状腺素、性激素、免疫蛋白等。胆汁酸在胆汁中的含量占到50％～60％，是胆汁的主要成分之一。胆汁酸是胆汁中存在的一类胆烷酸的总称。胆汁酸根据结构的不同可分为游离胆汁酸和结合胆汁酸，游离胆汁酸包括胆酸(CA)、去氧胆酸(DCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)和石胆酸(LCA)；结合胆汁酸是上述胆汁酸分别与甘氨酸和牛磺酸相结合的产物，主要包括甘氨胆酸(GCA)、牛磺胆酸(TCA)、甘氨鹅去氧胆酸(GCDCA)和牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)。[0003]在动物体内90％以上的胆汁酸以结合