一种从丹凤牡丹籽粕中提取白藜芦醇的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112552147A(43)申请公布日2021.03.26(21)申请号202011396994.5(22)申请日2020.11.24(71)申请人菏泽学院地址274015山东省菏泽市大学路2269号(72)发明人王冰韩刚启王娟刘建丽李华敏刘小倩王子涵李眉欣李家文张澳元(51)Int.Cl.C07C37/68(2006.01)C07C37/70(2006.01)C07C37/72(2006.01)C07C37/82(2006.01)C07C37/84(2006.01)C07C39/21(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种从丹凤牡丹籽粕中提取白藜芦醇的制备方法(57)摘要一种从丹凤牡丹籽粕中提取白藜芦醇的制备方法，属于天然产物技术领域，其特征在于：以丹凤牡丹籽粕为原料、经过酶法提取、超声提取、萃取、利用高压制备液相色谱分离纯化，进而实现其产品回收率高、纯度好的基本工艺流程。通过本发明的技术条件制备牡丹籽壳白藜芦醇，工艺操作简单，易实施，具有制备过程简单、产率高、纯度高和原料价廉的特点，可以广泛应用于保健品、食品和护肤品领域，具有很好的商业前景。CN112552147ACN112552147A权利要求书1/1页1.一种从丹凤牡丹籽粕中提取白藜芦醇的制备方法，提供一种通过以丹凤牡丹籽粕为原料、经过酶法提取、超声提取、萃取、利用高压制备液相色谱分离纯化，进而实现其产品回收率高、纯度好的基本工艺流程，其特征在于由以下步骤组成：(1)原料预处理：将丹凤牡丹籽粕干燥至水份10％以内粉碎，用20～60目的筛子进行筛分，得到丹凤牡丹籽粕细粉；(2)酶法提取：在牡丹籽粕细粉中，加入质量体积2～10倍的水，调pH至4.0～6.0，再添加0.1％～1％的纤维素酶、半纤维素酶、β‑葡萄糖苷酶、木聚糖酶的一种或者多种酶，在40～60℃下低速搅拌1～5h；酶解；(3)超声提取：酶解完成后，向以上料液加入体积分数60％～90％的乙醇水溶液，两者的体积比为1∶5～1∶20(g∶mL)，然后用超声波处理，功率80～150W，1～2h，提取温度30～60℃，提取1～3次，过滤，合并滤液，滤液于40～60℃下减压蒸发，回收有机溶剂，浓缩物经真空干燥或冷冻干燥，得到白藜芦醇苷的粗提物；(4)萃取：将白藜芦醇粗提物按质量体积比1∶10～1∶20(g∶mL)加入蒸馏水，50～60℃搅拌溶解，过滤，滤液加入体积比1∶1的石油醚萃取3～5次，合并石油醚萃取相，在40～60℃下减压浓缩得到石油醚萃取物；水层继续用乙酸乙酯等体积萃取3～5次，合并乙酸乙酯萃取相，用碱调其PH值为8.0～10.0，静置、过滤、减压浓缩至萃取液体积1/15～1/20，结晶出白藜芦醇苷粗提物；(5)水解富集：将所得白藜芦醇苷粗提物，按其体积配比加2％～10％的稀酸2～10倍量水解4～8h，水解富集后，冷却、静置24h，经过滤、洗酸获白藜芦醇粗品；(6)分离纯化：将所得白藜芦醇粗品溶于乙酸乙酯中，利用高压制备液相色谱分离纯化，高压制备液相色谱分离条件：色谱柱：WelchUltimateXB‑C18(10μm，21.2mm×250mm)；流速：25mL/min；进样体积：6mL；流动相A：含0.5％(v/v)乙酸的水溶液；流动相B：甲醇；等度洗脱：40％；紫外检测波长：308nm；收集白藜芦醇段洗脱液，再进行减压浓缩至小体积结晶、获得较高纯度的白藜芦醇粗品；(7)产品：将所获纯度较高的白藜芦醇粗品，用乙醇反复重结晶、获纯度大于99％的白色结晶状固态白藜芦醇产品。2CN112552147A说明书1/4页一种从丹凤牡丹籽粕中提取白藜芦醇的制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种从丹凤牡丹籽壳中制备白藜芦醇的方法，属于天然产物技术领域。背景技术[0002]牡丹(PaeoniasulfrulicosaAndr.)属于芍药科(Paeoniaeeae)、芍药属(Paeonia)多年生木本植物。牡丹根皮有很好的药用价值，在两千年以前，就记载于《本草经》。直到隋唐时期，牡丹则成为了名贵的观赏植物。牡丹籽为牡丹花结的种子，色黑、皮硬、味苦，不规则圆型，比黄豆稍大。牡丹籽在民间可以治疗腰腿疼痛，兴有消炎、抗氧化的作用。经中药化学和药理研究发现牡丹籽具有抗菌、消炎、镇静、降血糖、抗过敏及免疫调节等作用。牡丹籽粕为牡丹籽榨油后的固体渣粕，研究发现，牡丹籽粕中还含有大量的多酚类活性物质。其中包括白藜芦醇及其衍生物。白藜芦醇(Resveratrol)的化学名称为3，5，4′‑三羟基芪(3，5，4′‑trihydroxystilbene)，是一种非黄酮类多酚化合物，已知其天然植物来源包括葡萄、虎杖、牡丹、桑果和花生等。白藜芦