一种通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112980913A(43)申请公布日2021.06.18(21)申请号202110397699.X(22)申请日2021.04.14(71)申请人北京欣康研医药科技有限公司地址100020北京市朝阳区南磨房平乐园甲5号二层2200申请人济南市中医医院(72)发明人刘洋刘荣奎廖登玲刁恩军李雯章炳生季秀丽来馨玮刘丹丽张明亮(51)Int.Cl.C12P39/00(2006.01)C12P17/06(2006.01)C12N1/16(2006.01)C12R1/645(2006.01)C12R1/72(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称一种通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法(57)摘要本发明属于生物技术领域，具体涉及一种通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，经过分别活化、分别进行种子培养、发酵培养、黄芩素分离纯化最终得到黄芩素。通过马克斯克鲁维酵母菌和扁平云假丝酵母(Candidahumilis)YS023A菌共同发酵法用黄芩苷制备黄芩素，提高了黄芩素的收率，安全、无污染、操作方便、得到的黄芩素纯度高。CN112980913ACN112980913A权利要求书1/2页1.一种通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，包括：通过马克斯克鲁维酵母菌和扁平云假丝酵母(Candidahumilis)YS023A菌共同发酵法用黄芩苷制备黄芩素；所述马克斯克鲁维酵母菌的保藏编号为CGMCCNo.13907；所述扁平云假丝酵母(Candidahumilis)YS023A菌的保藏编号为CGMCCNo.17257；所述方法包括如下步骤：S1分别活化：将所述马克斯克鲁维酵母菌和所述扁平云假丝酵母(Candidahumilis)YS023A菌分别在基础培养基上进行活化；S2分别进行种子培养：从活化的所述马克斯克鲁维酵母菌中蘸取菌种，接种到基础培养基中，进行恒温振荡培养，得到第一种子液；从活化的所述扁平云假丝酵母(Candidahumilis)YS023A菌中蘸取菌种，接种到基础培养基中，进行恒温振荡培养，得到第二种子液；S3发酵培养：将接种量为5%10%的马克斯克鲁维酵母菌和接种量为1%5%的扁平云假丝酵母~~(Candidahumilis)YS023A菌接种到发酵培养基中，进行恒温振荡培养，得到发酵液；S4黄芩素分离纯化：对所述发酵液进行过滤，回收沉淀物，将所述沉淀物用乙酸乙酯溶解，过滤，对滤液进行减压浓缩，乙醇重结晶，得到黄芩素。2.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，所述基础培养基终浓度组成为：牛肉浸粉8~12g/L，蛋白胨10~15g/L，酵母浸粉4~7g/L，葡萄糖20~30g/L，磷酸氢二钾1~5g/L，柠檬酸氢二铵1~5g/L，乙酸钠1~5g/L，硫酸镁0.1~0.4g/L，硫酸锰0.03~0.07g/L，溶剂为水，pH为4~6。3.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，所述基础培养基体积为100mL，终浓度组成为：牛肉浸粉10g/L，蛋白胨13g/L，酵母浸粉5g/L，葡萄糖25g/L，磷酸氢二钾2g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.3g/L，硫酸锰0.05g/L，溶剂为水，pH为5.4。4.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，所述发酵培养基终浓度组成为：黄芩苷8~12g/L，水分含量为60%~90%的大豆渣5~10g/L，牛肉浸粉10~20g/L，蛋白胨15~25g/L，酵母浸粉5~10g/L，葡萄糖30~40g/L，磷酸氢二钾3~6g/L，柠檬酸氢二铵3~6g/L，乙酸钠812g/L，硫酸镁0.30.6g/L，硫酸锰0.0~~5~0.2g/L，溶剂为水，pH为4~6。5.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，所述发酵培养基体积为1L，终浓度组成为：黄芩苷10g/L，水分含量为80%的大豆渣8g/L，牛肉浸粉15g/L，蛋白胨20g/L，酵母浸粉7g/L，葡萄糖38g/L，磷酸氢二钾5g/L，柠檬酸氢二铵5g/L，乙酸钠10g/L，硫酸镁0.4g/L，硫酸锰0.1g/L，溶剂为水，pH为5.8。6.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，在步骤2CN112980913A权利要求书2/2页S1中，所述活化的条件为于30℃~40℃生化培养箱中培养8~15h。7.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述恒温振荡培养的条件为30℃~40℃、120r/min恒温振荡培养15h~30h。8.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制