一种人参皂苷CK软胶囊中人参皂苷CK的含量测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113138235A(43)申请公布日2021.07.20(21)申请号202110267520.9(22)申请日2021.03.11(71)申请人云南与诺生物工程有限责任公司地址650217云南省昆明市开区出口加工区浦发路16号B2栋二楼(72)发明人李俊浦滇艾黎文孟良刘兴李芮包崇卯尚云云刘雨珊(74)专利代理机构昆明正原专利商标代理有限公司53100代理人金耀生亢能(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称一种人参皂苷CK软胶囊中人参皂苷CK的含量测定方法(57)摘要本发明涉及一种人参皂苷CK软胶囊的含量测定方法，该方法包括以下步骤：对照品溶液的制备、供试品溶液的制备和样品检测。本发明建立的方法对人参皂苷CK软胶囊中的人参皂苷CK进行定量检测，实现对人参皂苷CK软胶囊的质量进行全面的评价和控制，能够为人参皂苷CK软胶囊临床应用的安全性和有效性提供依据。可节约检测时间和成本，不仅准确且简单易行。本发明专属性强，稳定性好，重复性好，回收率高。CN113138235ACN113138235A权利要求书1/1页1.一种人参皂苷CK软胶囊的含量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤（1）、对照品溶液的制备：制备对照品溶液，每1mL对照品溶液含人参皂苷CK10.13μg/ml~1.013mg/ml的溶液；步骤（2）、供试品溶液的制备：称取人参皂苷CK软胶囊内容物0.04~0.50g，精密称定，置于10ml容量瓶中，加入甲醇适量定容到10ml，超声10~30min，放冷，摇匀，取上清液过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液即得；步骤（3）、样品检测：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5~20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。2.根据权利要求1所述的人参皂苷CK软胶囊的含量测定方法，其特征在于：每1mL对照品溶液含人参皂苷CK0.2026mg/ml的溶液。3.根据权利要求1所述的人参皂苷CK软胶囊的含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速为0.5‑1.5ml/min；柱温25‑40℃；进样量5‑20μl；检测波长为203nm；流动相：A‑乙腈，B‑超纯水；进行梯度洗脱。4.根据权利要求3所述的人参皂苷CK软胶囊的含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中，梯度洗脱条件如下：。5.根据权利要求3所述的人参皂苷CK软胶囊的含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速为1.0ml/min；柱温30℃；进样量10μl；检测波长为203nm；流动相：A‑乙腈，B‑超纯水；进行梯度洗脱。6.根据权利要求5所述的人参皂苷CK软胶囊中人参皂苷CK的含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中，梯度洗脱条件如下：。2CN113138235A说明书1/7页一种人参皂苷CK软胶囊中人参皂苷CK的含量测定方法技术领域[0001]本发明属于软胶囊含量检测领域，具体涉及一种人参皂苷CK软胶囊中人参皂苷CK的含量测定方法。背景技术[0002]人参皂苷CK为原人参二醇类人参皂苷，其结构属四环三萜达玛烷型人参皂苷。1972年Yasioka等通过土壤中的细菌降解人参二醇型皂苷Rb1、Rb2和Rc的混合物，从中首次发现了人参皂苷CK，并鉴定了CK的结构为20(S)原人参二醇‑20‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷，但其药理活性并未得到重视。直到1991年日本学者Karikura等在给予人参皂苷Rb1、Rb2的Wistar大鼠肠道代谢物中再次发现并鉴定了人参皂苷CK，并通过比较酸水解物和肠道代谢物证明人参皂苷CK是肠道微生物的代谢物，而不是胃酸的水解产物。Hasegawa等系统的研究了人参皂苷在体内的肠道细菌代谢产物和粪便菌群厌氧培养后的代谢产物，并提出了人参皂苷经过肠道细菌转化成人参皂苷CK的代谢过程，这为人参皂苷CK后续的研究奠定了坚实的基础。在之后的研究中发现人参皂苷CK具有抗肿瘤、抗皮肤衰老、抗炎、抗过敏、抗糖尿病、保护神经、保护心肌、保护肝脏等多种药理活性。它在人参属植物中含量极低，无法满足开发应用的需求，目前主要通过微生物转化和酶转化制备得到。[0003]软胶囊是将液体原料药物或由固体原料药物溶解或分散制成的溶液、混悬液、乳状液或半固体密封于软质囊材中的胶囊剂，具有有效成分含量高、生物利用度高、吸收迅速、稳定性好、能掩盖药物的不良气味、服用量小、外形美观等特点。当将人参皂苷CK制备成自微乳作为软胶囊的内容物时药物在基质中以分子、胶体或无定形态分散，对其溶出和吸收非常有利。因此，有必要