一种复合发酵提取剑麻皂素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113943772A(43)申请公布日2022.01.18(21)申请号202010682697.0C12R1/685(2006.01)(22)申请日2020.07.15(71)申请人湖南怡田美农业科技有限公司地址415300湖南省常德市石门县夹山镇杨坪社区一组(72)发明人吴抗抗(74)专利代理机构长沙湘驰达知识产权代理事务所(普通合伙)43242代理人罗若愚(51)Int.Cl.C12P39/00(2006.01)C12P33/00(2006.01)C07J71/00(2006.01)C12N1/14(2006.01)C12R1/885(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种复合发酵提取剑麻皂素的方法(57)摘要本发明属于发酵技术技术领域，尤其为一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，该发酵制备方法包括以下步骤：步骤一：将哈茨木霉与黑曲霉分别接种于液体培养基中进行发酵，得发酵液；步骤二：将上述两种发酵液混合后添加到剑麻渣水培养基中再次进行发酵，发酵完成后收集发酵液中的沉淀；步骤三：提取所述沉淀中的剑麻皂素，所述液体培养基为马铃薯液体培养基，所述马铃薯液体培养基包括MS基础培养基和添加在所述培养基中的添加剂；本发明，通过设置该方法，现有的提取剑麻皂素的方法产品收率和纯度低，需要用到强酸、强碱或者有机溶剂不仅污染环境而且毒性大，工艺复杂，成本高，本发明所用的为生物菌种发酵法，节能环保，产量高。CN113943772ACN113943772A权利要求书1/1页1.一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，其特征在于：该发酵制备方法包括以下步骤：步骤一：将哈茨木霉与黑曲霉分别接种于液体培养基中进行发酵，得发酵液；步骤二：将上述两种发酵液混合后添加到剑麻渣水培养基中再次进行发酵，发酵完成后收集发酵液中的沉淀；步骤三：提取所述沉淀中的剑麻皂素。2.根据权利要求1所述的一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，其特征在于：所述液体培养基为马铃薯液体培养基。3.根据权利要求1所述的一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，其特征在于：所述马铃薯液体培养基包括MS基础培养基和添加在所述培养基中的添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计。4.根据权利要求1所述的一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，其特征在于：所述添加剂成分包括：吲哚乙酸0.05~0.5mg/L，蔗糖10~40g/L，6-苄氨基腺嘌呤0.5~1.0mg/L，萘乙酸0.3~1.0mg/L，椰汁20~30ml/L，ABT生根粉1~3mg/L，N-二甲氨基琥珀酰胺酸10~20mg/L，多效唑1.0~2.0mg/L；。5.根据权利要求1所述的一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，其特征在于：所述添加剂还包括活性炭和琼脂，所述活性炭质量分数为0.05~0.2%，所述琼脂质量分数为0.1~1%。6.根据权利要求1所述的一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，其特征在于：包括MS基础培养基和添加在所述培养基中的添加剂，包括吲哚乙酸0.3mg/L，蔗糖30g/L，6-苄氨基腺嘌呤0.8mg/L，萘乙酸0.5mg/L，椰汁25ml/L，ABT生根粉2mg/L，N-二甲氨基琥珀酰胺酸15mg/L，多效唑1.5mg/L；还包括质量分数为0.1%的活性炭和质量分数为0.5%的琼脂。7.根据权利要求1所述的一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，其特征在于：所述马铃薯液体培养基培育方法为，步骤一：称取相应质量的吲哚乙酸、蔗糖、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、椰汁、ABT生根粉、N-二甲氨基琥珀酰胺酸、多效唑、活性炭、琼脂依次加入到基础培养基中，搅拌均匀；步骤二：将pH调整至5.8，120°C灭菌20min即得。8.根据权利要求1所述的一种复合发酵提取剑麻皂素的方法，其特征在于：包括如下步骤；步骤一：将哈茨木霉接种于马玲薯培养基中，在温度25°C的条件下，调节培养基pH为5，摇床转速为140～160rpm，发酵6～7d，得发酵液；将黑曲霉接种于马玲薯培养基中，在温度30°C的条件下，调节培养基pH为4，摇床转速为140～160rpm，发酵6～7d，得发酵液；步骤二：将哈茨木霉发酵液和黑曲霉发酵液按体积比1：1～2混合，按接种量10％，接种于剑麻渣水培养基中，在温度28°C的条件下，摇床转速为140～160rpm，发酵3～4d，离心提取沉淀；所述剑麻渣水培养基的pH为5，所述剑麻渣水培养基的组成为每升所述剑麻渣水基质中添加KNO32g、K2HPO41g、KCl0.5g、MgSO4.7H2O0.5g和FeSO4.7H2O0.01g；所述剑麻渣水基质为剑麻刮麻机对成熟期的剑麻进行脱纤维处理后的剩余物；步骤三：将沉淀在65°C-75°C的条件下烘干2h-3h；每克干物料用18～22ml的甲