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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114516912A(43)申请公布日2022.05.20(21)申请号202210363709.2C07K1/30(2006.01)(22)申请日2022.04.07C07K1/22(2006.01)C07K1/18(2006.01)(71)申请人斐缦(长春)医药生物科技有限责任C07K1/12(2006.01)公司地址130015吉林省长春市高新区光谷大街1050号(72)发明人陈萱宜李宏强孙淑娟黄海军宋宇春李岩冬(74)专利代理机构北京八月瓜知识产权代理有限公司11543专利代理师陶敏(51)Int.Cl.C07K14/78(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书2页说明书12页附图1页(54)发明名称一种水解胶原蛋白及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种水解胶原蛋白及其制备方法和应用。水解胶原蛋白制备方法包括:S1:对牛皮进行预处理,得到预处理牛皮;S2:对预处理牛皮进行匀浆消化,得到匀浆消化液;其中,匀浆消化包括匀浆处理和采用胃蛋白酶进行的消化处理;S3:对匀浆消化液进行吸附过滤,得到吸附过滤液;S4:对至少部分吸附过滤液依次进行浓缩换液、离子交换层析、二次浓缩换液、过滤除菌、离心精制,得到胶原蛋白;S5:收集步骤S1‑S4的废液,以收集的废液和/或另一部分吸附过滤液作为水解前液,对水解前液进行酸水解,得到水解胶原蛋白。本发明能够同时制备水解胶原蛋白和胶原蛋白,水解胶原蛋白的分子量均一性好,胶原蛋白的收率和纯度高,产品质量优异。CN114516912ACN114516912A权利要求书1/2页1.一种水解胶原蛋白的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:S1:对牛皮进行预处理,得到预处理牛皮;S2:对预处理牛皮进行匀浆消化,得到匀浆消化液;其中,匀浆消化包括匀浆处理和采用胃蛋白酶进行的消化处理;S3:对匀浆消化液进行吸附过滤,得到吸附过滤液;S4:对至少部分吸附过滤液依次进行浓缩换液、离子交换层析、二次浓缩换液、过滤除菌、离心精制,得到胶原蛋白;S5:收集步骤S1‑S4的废液,以收集的废液和/或另一部分吸附过滤液作为水解前液,对水解前液进行酸水解,得到水解胶原蛋白。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,预处理包括:对牛皮进行清洗及清理,随后采用1‑10wt%的醋酸溶液进行浸泡,将浸泡后的牛皮搅碎成牛皮颗粒,得到预处理牛皮;优选地,控制浸泡温度为4‑25℃,浸泡时间为5‑10d。3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,匀浆处理包括:向预处理牛皮中加入注射用水,采用胶体磨对预处理牛皮进行匀浆,匀浆后调节pH值至2.0‑3.0,得到匀浆液;优选地,预处理牛皮与注射用水的比例为1kg:(2‑8)L;优选地,匀浆时加入黄原胶进行保护,预处理牛皮与黄原胶的重量比为1:(0.01‑0.02);优选地,胶体磨预先采用0.4‑0.6M的氢氧化钠溶液浸泡不少于30min;优选地,采用冰醋酸调节pH值;优选地,匀浆液中的牛皮含量为20‑25g/L。4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,消化处理包括:向匀浆处理得到的匀浆液中加入胃蛋白酶溶液进行消化,消化后灭酶,得到匀浆消化液;优选地,胃蛋白酶溶液采用0.4‑0.6M的醋酸作为溶剂;优选地,胃蛋白酶溶液的酶活为1000‑9000IU/mL;优选地,胃蛋白酶溶液与匀浆液的体积比为(0.8‑1.2):100;优选地,控制消化温度为4‑25℃,消化时间为7‑10d;优选地,灭酶包括:采用8‑12M的氢氧化钠溶液将消化后的匀浆液的pH值调节至9.0‑10.0,静置过夜。5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,吸附过滤包括:将匀浆消化液的pH值调节至3.9‑4.1,随后加入预处理硅藻土进行静置吸附,收集上清液并过滤,得到吸附过滤液;优选地,预处理硅藻土的制备方法包括:采用8‑12mM的盐酸溶液将硅藻土浸泡2h以上,浸泡后采用纯化水清洗3次以上,得到预处理硅藻土;优选地,预处理硅藻土的加入量为14‑16g/L匀浆消化液;优选地,在加入预处理硅藻土的同时加入半乳糖醛酸,半乳糖醛酸的加入量为1‑2g/L匀浆消化液;优选地,控制静置吸附时间为1‑3h。6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,浓缩换液和二次浓缩换液分别包括:2CN114516912A权利要求书2/2页采用100kD的超滤膜,使用pH4‑5的醋酸缓冲液换液1‑3次,换液后浓缩收液。7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,离子交换层析包括:在层析柱中装入阳离子交换树脂,采用10‑20mM的醋酸缓冲液冲洗平衡后上样,上样后使用10‑20mM的醋酸缓冲液冲洗杂蛋白,再用含有10‑300mM氯