一株低产芽孢解淀粉芽孢杆菌及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115786300A(43)申请公布日2023.03.14(21)申请号202211461449.9C12N15/55(2006.01)(22)申请日2022.11.22C12N1/20(2006.01)C12N9/54(2006.01)(83)生物保藏信息C12N3/00(2006.01)GDMCCNO:626512022.07.27C12R1/01(2006.01)(71)申请人天曲生物科技有限公司地址528200广东省佛山市南海区西樵镇观山城区江浦西路45号房管大厦第八层805房申请人佛山市海天（高明）调味食品有限公司佛山市海天调味食品股份有限公司(72)发明人刘翔周其洋周斌廖艺楠高庭(51)Int.Cl.C12N9/16(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称一株低产芽孢解淀粉芽孢杆菌及其应用(57)摘要本发明涉及一株低产芽孢解淀粉芽孢杆菌及其应用。本发明菌在液态发酵生产中性蛋白酶中能降低其产孢能力，从而大幅降低发酵液中孢子数量，达到提高中性蛋白酶的产量及活性。本发明解淀粉芽孢杆菌的磷酸丝氨酸磷酸酶氨基酸序列突变及其编码基因rsbU的位点突变是使得该菌具有低产孢特性的关键因素。本发明所述低产孢突变菌株获得的发酵液易于后续的分离提取中性蛋白酶。本发明所述低产孢突变菌株的发酵液经上述分离过程后，酶活回收率可达89％。CN115786300ACN115786300A权利要求书1/1页1.一种磷酸丝氨酸磷酸酶，其特征在于，所述磷酸丝氨酸磷酸酶的氨基酸序列的第173位由甲硫氨酸变为缬氨酸。2.如权利要求1所述的磷酸丝氨酸磷酸酶，其特征在于，所述磷酸丝氨酸磷酸酶的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。3.一种磷酸丝氨酸磷酸酶的编码基因rsbU，其特征在于，所述基因rsbU的cDNA序列的第517bp由A变为G。4.如权利要求3所述的编码基因rsbU，其特征在于，所述基因rsbU的cDNA序列如SEQIDNO:2所示，所述基因rsbU编辑权利要求2所述的氨基酸序列。5.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的保藏号为GDMCCNo:62651。6.如权利要求5所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌含有权利要求1所述的磷酸丝氨酸磷酸酶。7.如权利要求5所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌含有权利要求3所述的基因rsbU。8.如权利要求5所述的解淀粉芽孢杆菌在制备中性蛋白酶中的应用。9.如权利要求1所述的磷酸丝氨酸磷酸酶或如权利要求3所述的磷酸丝氨酸磷酸酶的编码基因rsbU或如权利要求5所述的解淀粉芽孢杆菌在降低解淀粉芽孢杆菌发酵液孢子中的应用。10.一种降低解淀粉芽孢杆菌发酵液孢子数量的方法，其特征在于，使用权利5所述的解淀粉芽孢杆菌进行发酵的方法。2CN115786300A说明书1/7页一株低产芽孢解淀粉芽孢杆菌及其应用技术领域[0001]本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一株低产芽孢解淀粉芽孢杆菌及其应用。背景技术[0002]芽孢杆菌是自然界中常见的细菌，因其具有形成芽孢的能力，故能够耐受较为恶劣的外部环境，如：耐高温、耐高盐、耐射线等。也正因如此，芽孢杆菌的分布很广，土壤、水、空气以及动物肠道中都有芽孢杆菌的存在。解淀粉芽孢杆菌为芽孢杆菌的一种，目前对于解淀粉芽孢杆菌的研究大多集中于其产酶能力上，尤其是产蛋白酶的能力。[0003]芽孢杆菌在发酵产酶过程中，尤其是在菌体生长达到稳定期后，由于营养物质的消耗及某些代谢产物的积累，发酵条件发生了变化，菌体极易形成芽孢，从而以芽孢休眠体的形式对不适宜生长的环境进行应答。芽孢一旦形成，将对发酵产酶带来诸多不利影响，如会使发酵液粘度增加、泡沫增多，造成冒料；并且形成芽孢后的菌体处于休眠状态，大量芽孢的形成会严重影响蛋白酶的产量、酶活及高密度营养菌体的获得，从而降低原料利用率；芽孢的形成不仅受到外部生长环境的诱导，同时还取决于菌体内芽孢形成相关基因的激活表达或抑制。因为营养菌体形成芽孢的过程包含多个步骤，所以芽孢形成是一个多基因调控过程。[0004]有研究报道，磷酸丝氨酸磷酸酶是一种能够间接激活SigB(一种胁迫应答RNA聚合酶sigma因子)的磷酸酶，其编码基因rsbU的活跃能够间接导致SigB的活跃。SigB是可能发生在生长或静止期的应激性生理信号(如磷酸盐限制、盐胁迫、酸冲击等)的主要应答者，可以激活约150个基因的表达，SigB的激活会使得细菌产孢能力降低。因此，通过激活磷酸丝氨酸磷酸酶编码基因rsbU降低细菌的产孢能力成为降低芽孢杆菌产孢的新手段。发明内容[0005]本发明的目的在