从香紫苏醇微生物发酵液中富集和纯化香紫苏醇的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116003221A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202211431986.9(22)申请日2022.11.16(71)申请人辽宁蒽进生物技术有限公司地址118004辽宁省丹东市丹东高新技术产业开发区育成中心1号楼1010室(72)发明人栾宏伟周雍进(74)专利代理机构沈阳科苑专利商标代理有限公司21002专利代理师马驰(51)Int.Cl.C07C29/76(2006.01)C07C29/78(2006.01)C07C35/36(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称从香紫苏醇微生物发酵液中富集和纯化香紫苏醇的方法(57)摘要本发明公开了一种从香紫苏醇生产菌株发酵液中富集和纯化香紫苏醇的方法。方法包括(1)发酵液离心得到菌体和香紫苏醇混合物；(2)用有机溶剂溶解混合物中香紫苏醇，离心获得上清；(3)上清蒸干后，加入溶剂进行结晶，得到香紫苏醇产品I。该产品香紫苏醇的含量>97％，收率>70％；获得的结晶母液可以利用层析结合结晶手段，得到香紫苏醇产品II，该产品香紫苏醇的含量>95％，收率>65％；综合产品I和II，总收率可达90％以上。本发明的提取和纯化过程步骤少，收率高，操作简单，所用溶剂可循环利用，对环境友好。CN116003221ACN116003221A权利要求书1/1页1.从香紫苏醇微生物发酵液中富集和纯化香紫苏醇的方法，其特征在于，操作流程主要步骤包括：1)将香紫苏醇的微生物发酵液以3000rpm‑15000rpm的转速离心5‑30min，除去上清液，收集下层沉淀；2)向沉淀中加入醇溶剂，在35‑40摄氏度下搅拌2‑4h用于香紫苏醇的提取，提取液离心固液分离后，沉淀再次用醇溶剂提取离心，反复提取离心，共提取离心3‑5次，合并离心上清液，浓缩至干，得到提取物；3)向提取物中加入溶剂，50‑60摄氏度加热溶解，过滤除去不溶物，滤液结晶，固液分离，得到结晶母液和纯化的香紫苏醇产品I；4)获得的结晶母液直接过硅胶层析柱，并依次用正己烷和乙酸乙酯进行洗脱，正己烷(体积ml)：硅胶(质量g)＝5～8:1，乙酸乙酯(体积ml)：硅胶(质量g)＝5～8:1，收集含香紫苏醇的组分，浓缩至干；5)干燥后含香紫苏醇组分的样品加入溶剂，50‑60摄氏度加热溶解，过滤除去不溶物，滤液结晶，得到纯化的香紫苏醇产品II。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所使用的醇溶剂为体积分数为50％～95％的乙醇，较优的是体积分数70～90％的乙醇，更优的是体积分数75～85％乙醇。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(2)中单次醇溶剂加入量为沉淀：溶剂(体积比)＝1:1～1:4.5，较优的为1:1.5～1:3，更优的为1:2～1:2.5。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(5)中溶剂分别为石油醚或正己烷中的一种或二种，优选正己烷。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(5)中溶剂加入量分别为，提取物：溶剂(质量体积比，g/ml)＝1:1.5～1:5，较优的为1:1.5～1:3，更优的为1:2～1:2.5。6.根据权利要求1或4或5所述的方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(5)中结晶温度分别为‑5～20℃，较优的为5～15℃，更优的是11～12℃。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(5)中结晶时间分别为1～20h，较优的是5～15h，更优的是10～12h。8.根据权利要求1所述的一种从香紫苏醇发酵液中富集和纯化香紫苏醇的方法，其特征在于，步骤(4)中上样量为，样品(结晶母液中固体质量)：硅胶(质量比，g/g)＝1:3～1:10，优选1:4～1:8，更优的是1:5～1:6。2CN116003221A说明书1/6页从香紫苏醇微生物发酵液中富集和纯化香紫苏醇的方法技术领域[0001]本发明公开了一种从发酵液中富集和纯化香紫苏醇的方法。属于生物功能分子提取与纯化领域。背景技术[0002]香紫苏醇(Sclareol)是一种二萜类化合物，结构如下所示是植物生长，发育和一般代谢必不可少的化学物质，可应用于医药，化妆品，保健品，香精香料及农药领域。[0003]目前较多的报道都是从香紫苏花序中提取分离天然的香紫苏醇。随着合成生物学的不断发展，利用合成生物学的方法生产香紫苏醇的技术不断成熟。但是对于微生物发酵法生产香紫苏醇的下游工作，即从发酵液中富集和纯化香紫苏醇的报道极少。专利(申请号202210267083.5)公开了一种从香紫苏醇发酵液中提取和纯化香紫苏醇的方法，但是，该工艺的分离对象为胞内产生的香紫苏醇，对于绝大多数胞外产香紫苏醇微生物的发酵液，由于发酵液成分