肠道嗜粘蛋白-阿克曼氏菌的检测试剂盒及其检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115747357A(43)申请公布日2023.03.07(21)申请号202211431133.5(22)申请日2022.11.15(71)申请人迪辅乐生物（上海）有限公司地址200335上海市长宁区临虹路3号1号楼(B幢)802室(实际楼层为7层)(72)发明人罗疆张姣蒋秋悦陈东波沈阳庾庆华(74)专利代理机构南京行高知识产权代理有限公司32404专利代理师肖念(51)Int.Cl.C12Q1/689(2018.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/01(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称肠道嗜粘蛋白-阿克曼氏菌的检测试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明公开了特异性引物对，所述特异性引物对包括上游引物AM192F和下游引物AM371R，所述上游引物AM192F的序列如SEQIDNO：1所示，所述下游引物AM371R的序列如SEQIDNO：2所示。本发明还公开含有该特异性引物对的检测试剂盒及其应用。本发明还公开了一种肠道嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的检测方法。本发明基于肠道嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的肠道菌群结构分析、临床检验指导和用药、肠道菌群动态平衡研究、预防疾病提供了一种新的方案和途径。CN115747357ACN115747357A权利要求书1/1页1.特异性引物对，其特征在于，所述特异性引物对包括上游引物AM192F和下游引物AM371R，所述上游引物AM192F的序列如SEQIDNO：1所示，所述下游引物AM371R的序列如SEQIDNO：2所示。2.权利要求1所述的特异性引物对扩增的目的片段，其特征在于，所述目的片段序列如SEQIDNO：3所示。3.权利要求1所述的特异性引物对或权利要求2所述的目的片段在制备检测嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的试剂盒中的应用。4.一种检测嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的特异性引物对和/或权利要求2所述的目的片段。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括实时荧光定量PCR扩增所用的试剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述实时荧光定量PCR扩增所用的试剂包括PowerTrackSYBRGreenMasterMix和ddH2O。7.权利要求1所述的特异性引物对、权利要求4～6任一项所述的检测嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的试剂盒在检测嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括发酵乳制品、益生菌产品、粪便或土壤样品中嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的检测。9.一种嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的检测方法，其特征在，包括以下步骤：提取样品中的核酸样本，采用权利要求1所述的特异性引物对或权利要求4～6任一项所述的试剂盒进行实时荧光定量PCR扩增检测所述核酸样本进而判断是否含有嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌。10.根据权利要求9所的检测方法，其特征在于，所述样品为粪便。2CN115747357A说明书1/6页肠道嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的检测试剂盒及其检测方法技术领域[0001]本发明属于肠道微生物检测领域，具体涉及肠道嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌的检测试剂盒及其检测方法。背景技术[0002]2004年，Derrien等首次从人体粪便中分离出了嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌(Akkermansiamuciniphila)，通过16SrRNA基因测序分析出其属于疣微菌门，后被归类Akkermansiaceae科，Akkermansiaceae为疣微菌门第II科(FamilyII.Akkermansiaceaefam.nov.)，Akkermansia属是科内唯一菌属，A.muciniphila是疣微菌门中第一个被成功分离和鉴定的肠道菌。嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌是革兰氏阴性厌氧菌，呈卵圆形，普遍存在于人体肠道中，约占肠道细菌总数的1％～4％，可以使用胃肠道粘蛋白作为唯一的碳源和氮源。A.muciniphila定植于肠道黏液层，降解黏蛋白，刺激杯状细胞产生更多新的黏蛋白，可降低宿主蛋白的沉积，新生黏蛋白又刺激A.muciniphila的生长，二者形成反馈回路，使肠道黏液层不断更新，对肠上皮细胞起到良好的保护作用。[0003]大量研究表明，肠道中嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌(Akkermansiamuciniphila)的丰度除了与肥胖、II型糖尿病等代谢疾病相关外，还与动脉粥样硬化、阑尾炎、结肠炎、克罗恩病、孤独症等呈负相关。可以看出，嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌(Akkermansiamuciniphila)在宿主体内存在着复杂的机制作用。保持肠道内正常丰度的嗜粘蛋白‑阿克曼氏菌(Akkennansiamuciniphila