一种鉴别防风与水防风的检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115856163A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211376717.7C07D493/04(2006.01)(22)申请日2022.11.04(71)申请人绍兴市食品药品检验研究院地址312071浙江省绍兴市马山镇世纪东街286号(72)发明人邓俊杰毛威谢浙裕吕林锋刘刚朱辉(74)专利代理机构绍兴普华联合专利代理事务所(普通合伙)33274专利代理师朱建刚(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/72(2006.01)G01N30/74(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书3页说明书10页附图12页(54)发明名称一种鉴别防风与水防风的检测方法(57)摘要本发明公开了一种鉴别防风与水防风的检测方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备；(2)样品分析，分别采集供试品溶液的总离子流图；(3)PCA分析和聚类分析；(4)差异性标志物的筛选：使用MPP数据处理软件的查找特征化合物功能，将防风和水防风分为两组，根据化合物响应值筛选组间的差异化合物，通过解析各差异化合物的提取离子流图，获得峰形好、响应值高、保留时间适中且防风中不存在的差异性标志物；(5)差异性标志物的分离纯化与化学结构鉴定；(6)对照品溶液的制备；(7)待测样品溶液的制备；(8)检测与判定。本发明从化学成分角度建立防风与水防风辨识的新方法，该方法灵敏、准确、可靠，可用于防风的质量控制。CN115856163ACN115856163A权利要求书1/3页1.一种鉴别防风与水防风的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：分别取等量的多批确切来源的防风和水防风样品粉末，各样品粉末中分别加入甲醇，称定重量，超声处理后放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，超高速离心，取上清液，即得各供试品溶液；(2)样品分析：分别取步骤(1)制备的供试品溶液各1μL，采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱仪分别采集供试品溶液的总离子流图；(3)PCA分析和聚类分析：将步骤(2)所得的质谱原始数据导入MPP数据处理软件，提取特征峰数据，对特征峰进行主成分分析和聚类分析；(4)差异性标志物的筛选：使用MPP数据处理软件的查找特征化合物功能，将防风和水防风分为两组，根据化合物响应值筛选组间的差异化合物，通过解析各差异化合物的提取离子流图，获得峰形好、响应值高、保留时间适中且防风中不存在的差异性标志物；(5)差异性标志物的分离纯化与化学结构鉴定：采用硅胶柱层析法从水防风供试样品中分离纯化出高纯度差异性标志物，通过质谱和核磁鉴定，确定该差异性标志物的结构式为(6)对照品溶液的制备：取差异性标志物加入甲醇，制成每1ml含2μg差异性标志物的溶液；(7)待测样品溶液的制备：取待测样品粉末，加入甲醇，称定重量，超声处理后放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；(8)检测与判定：分别吸取等量对照品溶液与待测样品溶液，注入采用液相色谱仪或高效液相色谱‑质谱联用仪进行检测，得到液相色谱图或提取离子流色谱；若待测样品溶液的液相色谱图中，在与对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置上未出现相同的色谱峰，判定待测样品为防风；若待测样品溶液的液相色谱图中，在与对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置上出现相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在190～400nm波长范围内的紫外‑可见吸收光谱，若紫外‑可见吸收光谱不相同，则判定待测样品为防风，若紫外‑可见吸收光谱相同，则判定待测样品掺杂水防风；若待测样品溶液的提取离子流色谱中，在与对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置上未出现相同的色谱峰，则判定待测样品为防风，反之则判定待测样品掺杂水防风。2.如权利要求1所述一种鉴别防风与水防风的检测方法，其特征在于，步骤(1)制备供2CN115856163A权利要求书2/3页试品溶液的具体步骤为：分别取防风和水防风样品粉末各1g，精密称定，分别加入70v/v％甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷至室温，再称定重量，用70v/v％甲醇补足减失的重量，摇匀，超高速离心，各取上清液，即得。3.如权利要求1所述一种鉴别防风与水防风的检测方法，其特征在于，步骤(2)进行样品分析的液相色谱条件为：4.6mm×50mm、2.7μmAgilentPoroshell120EC‑C18的色谱柱，流动相：乙腈‑0.1％甲酸溶液，柱温30℃，流速0.5mL·min‑1；质谱条件为电喷雾离子化源，采集模式为正离子模式，干燥气温度为300℃，干燥气流速为5L/min，雾化器压力为35psi，鞘气温度为350℃，鞘气流速为11L/min，毛