一种模拟临床化疗耐药过程的肝癌耐药动物模型构建方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115868453A(43)申请公布日2023.03.31(21)申请号202211538522.8(22)申请日2022.12.01(71)申请人中国中医科学院中药研究所地址100700北京市东城区东直门内南小街16号中国中医科学院中药研究所(72)发明人张彦琼马兆臣刘毓东(74)专利代理机构北京天才之火知识产权代理有限公司16125专利代理师耿超(51)Int.Cl.A01K67/027(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表（电子公布）附图6页(54)发明名称一种模拟临床化疗耐药过程的肝癌耐药动物模型构建方法(57)摘要本公开提供了一种构建肝癌耐药动物模型的方法及该方法构建得到的肝癌耐药动物模型，该构建方法简单便捷、能够真实模拟肝癌耐药发生、发展的原位肿瘤发生模型。CN115868453ACN115868453A权利要求书1/1页1.一种构建肝癌耐药动物模型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1、培养荧光标记的肝癌细胞；S2、将所述荧光标记的肝癌细胞移植至小鼠肝脏中，得到移植后的小鼠；S3、将所述移植后的小鼠培养1‑3周后，尾静脉注射荧光显像剂，利用动物活体成像法监测药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度；S4、给予小鼠抗肝癌化疗药物治疗，给药3‑8周后，利用动物活体成像法监测药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度；若药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度不小于药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度，则得到所述肝癌耐药动物模型。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述小鼠为4‑6周龄BALB/C裸鼠。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗肝癌药物为索拉非尼，给药量为每2天15‑60mg/kg，优选为每2天30mg/kg。4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S2中，所述肝癌细胞的移植量为(2‑5)×106个。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述荧光显像剂包括D‑荧光素钾盐和/或18F‑FDG。6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肝癌细胞通过以下方法制备得到：通过脂质体包裹带有neo抗性基因和荧光素酶报告基因的表达质粒PGL4.17，体外转染人肝癌细胞HepG2。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述neo抗性基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述荧光素酶报告基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。8.权利要求1‑7任一项所述的方法构建得到的肝癌耐药动物模型。2CN115868453A说明书1/4页一种模拟临床化疗耐药过程的肝癌耐药动物模型构建方法技术领域[0001]本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种构建肝癌耐药动物模型的方法、该方法构建得到的肝癌耐药动物模型。背景技术[0002]相对于其它肿瘤类型，肝癌耐药领域的基础和临床研究十分匮乏，特别是缺少合适的动物模型。在以往的研究中，为了定量监测肝癌耐药动物肿瘤动态变化过程，肝癌耐药动物模型均采用裸鼠皮下接种耐药肿瘤细胞或肿瘤组织。临床肝癌是肝癌细胞侵袭肝脏组织，而皮下接种的肿瘤细胞脱离了肝脏的营养及代谢环境；更为重要的是，耐药肿瘤细胞或组织是通过体外细胞培养技术诱导后产生耐药的，而非肝脏肿瘤经化疗药物治疗后产生的耐药，因此无论是肿瘤的生长还是对化疗药物的耐药过程，均与临床肝癌耐药相距甚远。[0003]现有模型包括人源肿瘤组织异种移植模型，人源肿瘤细胞异种皮下移植模型。但现有三种模型都存在一定的缺陷，比如人源肿瘤组织来源异种移植，存在标本需经过严格的伦理审查，程序复杂且获得性差；现有人源肿瘤细胞异种移植存在荷瘤小鼠必须是免疫严重缺陷型裸小鼠，饲养条件苛刻且价格昂贵，同时移植位置不是肝癌原发部位，不能很好的模拟肝癌的发生发展。可见，以往报道的病人来源肿瘤异种移植模型、细胞来源异种移植在肝癌研究中起到了重要作用，但是它们具有标本获取困难且程序复杂等缺陷。[0004]因此亟需一种构建方法简单便捷、能够真实模拟肝癌耐药发生、发展的原位肿瘤发生模型。发明内容[0005]本公开的目的是提供一种构建方法简单便捷、能够真实模拟肝癌耐药发生、发展的原位肿瘤发生模型。[0006]为了实现上述目的，本公开提供了一种构建肝癌耐药动物模型的方法，该方法包括以下步骤：[0007]S1、培养荧光标记的肝癌细胞；[0008]S2、将所述荧光标记的肝癌细胞移植至小鼠肝脏中，得到移植后的小鼠；[0009]S3、将所述移植后的小鼠培养1‑3周后，尾静脉注射荧光显像剂，利用动物活体成像法监测药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度；[0010]S4、给予小鼠抗肝癌化疗药物治疗，给药3‑8周后，利用动物活体成像法监测药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度；若药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度不小于药物干预前小