靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115894614A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211247298.7(22)申请日2022.10.12(71)申请人河南省农业科学院地址450002河南省郑州市金水区花园路116号(72)发明人金前跃张改平王方雨郭振华卢清侠邢广旭张桂悦魏蔷王丽柴书军邢云瑞(74)专利代理机构郑州市华翔专利代理事务所(普通合伙)41122专利代理师张爱军(51)Int.Cl.C07K7/06(2006.01)A61K38/08(2019.01)A61P31/14(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表（电子公布）附图11页(54)发明名称靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用(57)摘要本发明涉及靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用，所述亲和肽的序列为WRCKVR、WKHKRR或WKHWYK。本发明通过分子对接虚拟筛选技术，以TAstV‑2Spike蛋白的晶体结构为模板，运用SWISS‑MODEL软件进行同源建模，获得GAstVSpike蛋白的三维结构。利用SYBYL软件选定Spike蛋白结构的C端部分区域为活性口袋，运用Surflex‑Dock/SYBYL功能将库中的多肽配基与选定口袋进行分子对接，根据Cscore综合评估对接结果，筛选出特异识别GAstVSpike蛋白的亲和肽，为后续抗病毒多肽药物的研究奠定了基础。CN115894614ACN115894614A权利要求书1/1页1.靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽，其特征在于，所述亲和肽的序列为WRCKVR、WKHKRR或WKHWYK。2.一种如权利要求1所述的亲和肽在制备抑制鹅星状病毒感染药物方面的应用。2CN115894614A说明书1/8页靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用技术领域[0001]本发明涉及靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用，属于生物技术领域。背景技术[0002]鹅星状病毒(Gooseastrovirus，GAstV)作为一种新发病原，可导致雏鹅全身性内脏痛风，表现为高感染率和高死亡率。2016年暴发以来，给中国养鹅业带来了严重损失。刺突蛋白(Spike)位于鹅星状病毒表面，是重要的抗原蛋白，可诱导宿主的免疫反应，并介导病毒粒子与细胞表面受体的结合，因此Spike蛋白是诊断试剂开发和药物筛选的重要靶标。[0003]在治疗病毒性疾病的策略中，除病毒复制酶之外，干扰病毒入胞也是一种有效的途径，并且相较于胞内靶点其作用更直接有效。通常有两种方式阻止病毒入胞：其一，靶向病毒结合的细胞受体来阻止病毒进入宿主细胞；其二，靶向病毒的表面蛋白来阻止病毒的吸附过程。然而，作为与病毒入胞相关的受体蛋白往往担负着较为复杂的生理功能，一旦封闭，很可能会引起机体相关的副作用；因此，靶向病毒表面蛋白的药物设计策略是一种较为理想的抗病毒药物开发思路。发明内容[0004]针对现有技术的不足，本发明的目的是提供3条鹅星状病毒Spike蛋白亲和肽及其应用。[0005]为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：[0006]一种靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽，所述亲和肽的序列为WRCKVR、WKHKRR或WKHWYK。[0007]所述的亲和肽在制备抑制鹅星状病毒感染药物方面的应用。[0008]本发明有益效果：[0009]本发明通过分子对接虚拟筛选技术，期望获得靶向GAstVSpike蛋白的亲和性多肽配基。首先以TAstV‑2Spike蛋白的晶体结构为模板，运用SWISS‑MODEL软件进行同源建模，获得GAstVSpike蛋白的三维结构。接下来利用SYBYL软件选定Spike蛋白结构的C端部分区域为活性口袋，再运用Surflex‑Dock/SYBYL功能将库中的多肽配基与选定口袋进行分子对接，最后根据Cscore综合评估对接结果，筛选出30条特异识别GAstVSpike蛋白的亲和肽，为后续抗病毒多肽药物的研究奠定了基础。[0010]本发明将30条人工合成的亲和肽与GAstV共孵育后接种到LMH细胞上，通过IPMA直接筛选抑制GAstV增殖的多肽，并对筛选出的多肽进行细胞毒性鉴定，综合实验结果筛选出3条GAstV高效抗病毒亲和肽；采用ELISA、IFA、TCID50等方法进一步证实了该亲和肽的抗病毒活性，并确定了其对应的抗病毒靶点。3CN115894614A说明书2/8页附图说明[0011]图1GAstVSpike蛋白同源建模后3D结构展示。[0012]图2分子对接最佳活性口袋展示。[0013]图3IPMA筛选抑制GAstV增殖的多肽AP19(×200μm)。[0014]其中，A：多肽处理；B：阳性对照；C：阴性对照。[0015]