一种石油烃类降解复合菌剂及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109576186A(43)申请公布日2019.04.05(21)申请号201811616635.9C12R1/10(2006.01)(22)申请日2018.12.27C12R1/01(2006.01)C12R1/07(2006.01)(71)申请人天津天丰泽田生物科技有限公司C09K101/00(2006.01)地址300457天津市滨海新区经济技术开发区睦宁路7号科研楼四层北侧(72)发明人高雪燕张见邢军(74)专利代理机构天津合志慧知识产权代理事务所(普通合伙)12219代理人陶怡(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)B09C1/10(2006.01)C09K17/40(2006.01)C12R1/32(2006.01)C12R1/38(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种石油烃类降解复合菌剂及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种石油烃类降解复合菌剂及其制备方法，该方法包括如下步骤：1)制备降解菌悬液：将分支杆菌CSC-6、门多萨假单胞菌PM、施氏假单胞菌JN4、施氏假单胞菌JN5、地衣芽孢杆菌Y-1、短小芽孢杆菌L-2、不动杆菌XH-2和琼氏不动杆菌BD分别培养至对数生长期；之后将各个菌悬液混合得到降解菌悬液；2)向所述步骤1)得到的降解菌悬液中加入吸附剂和海藻酸钠；3)将所述步骤2)得到的中间物加入造粒机中造粒；4)制备包膜乳液；5)将所述步骤4)得到的包膜乳液喷涂至所述步骤3)得到的颗粒表面，从而得到石油烃类降解复合菌剂。该方法制备的复合菌剂能够有效降解土壤中的石油，达到治理石油污染土壤的目的。CN109576186ACN109576186A权利要求书1/1页1.一种石油烃类降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)制备降解菌悬液：将分支杆菌CSC-6、门多萨假单胞菌PM、施氏假单胞菌JN4、施氏假单胞菌JN5、地衣芽孢杆菌Y-1、短小芽孢杆菌L-2、不动杆菌XH-2和琼氏不动杆菌BD分别培养至对数生长期，用分别用生理盐水将菌体洗净后，再用生理盐水将菌体调配成菌悬液，使菌悬液的OD600＝0.5-1；之后将分支杆菌CSC-6、门多萨假单胞菌PM、施氏假单胞菌JN4、施氏假单胞菌JN5、地衣芽孢杆菌Y-1、短小芽孢杆菌L-2、不动杆菌XH-2和琼氏不动杆菌BD的菌悬液按照体积比1-1.5:1-1.2:0.5-1:0.5-1:0.1-0.5:0.1-0.5:0.1-0.5:0.1-0.5混合得到降解菌悬液；2)向所述步骤1)得到的降解菌悬液中加入吸附剂和海藻酸钠，混匀后干燥；3)将所述步骤2)得到的中间物加入造粒机中造粒；4)制备包膜乳液：将葡萄糖、复合酶、NH4NO3、KH2PO4、MgSO4、CaCl2、Na2HPO4、蛋白胨、琼脂、酵母粉按照重量份数比30-50：10-25：1-10:1-8:2-5：1-5:3-6:40-50:10-15:20-40混匀，得到混合粉体；将该粉体与水按重量份数比1:5混合，然后球磨混合6-8h，得到包膜乳液；5)将所述步骤4)得到的包膜乳液喷涂至所述步骤3)得到的颗粒表面，从而得到石油烃类降解复合菌剂。2.根据权利要求1所述的石油烃类降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述复合菌剂中，分支杆菌CSC-6的活菌含量为1×108～1×1010cfu/g，门多萨假单胞菌PM的活菌含量为1×108～7×109cfu/g，施氏假单胞菌JN4的活菌含量为1×107～3×108cfu/g，施氏假单胞菌JN5的活菌含量为1×107～3×108cfu/g，地衣芽孢杆菌Y-1的活菌含量为1×105～2×107cfu/g，短小芽孢杆菌L-2的活菌含量为1×105～1×107cfu/g，不动杆菌XH-2的活菌含量为1×105～3×107cfu/g和琼氏不动杆菌BD的活菌含量为1×105～2.5×107cfu/g。3.根据权利要求1述的石油烃类降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述复合酶包括甘油醛-3-磷酸脱氢酶、纤维素酶和β-葡萄糖酶。4.根据权利要求1所述的石油烃类降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤5)中的包膜乳液喷涂4-6次，每次喷涂厚度为0.1-0.2mm，每次喷涂结束在真空度为1-3kpa、温度为-5～-2℃下冷冻20-25分钟后再进行下一次喷涂。5.根据权利要求1所述的石油烃类降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤3)得到的颗粒的粒径为3-4mm。6.根据权利要求1所述的石油烃类降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中干燥温度为25-35℃。7.根据权利要求1所述的石油烃类降解复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤4)球磨的速度