一种生物炭基固定化微生物菌剂及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109628353A(43)申请公布日2019.04.16(21)申请号201910027012.6(51)Int.Cl.(22)申请日2019.01.11C12N1/20(2006.01)C12N11/14(2006.01)(83)生物保藏信息C02F3/34(2006.01)CCTCCNo.M20177262017.11.27C12R1/32(2006.01)(71)申请人永清环保股份有限公司地址410330湖南省长沙市浏阳市国家生物医药产业基地(319国道旁)申请人永清启堃土壤修复科技股份（上海）有限公司(72)发明人罗启仕闫淑兰赵秀红崔长征李梓冉雨灵吴晴雯任静(74)专利代理机构上海科盛知识产权代理有限公司31225代理人褚明伟权利要求书2页说明书5页附图3页(54)发明名称一种生物炭基固定化微生物菌剂及其制备方法与应用(57)摘要本发明涉及一种生物炭基固定化微生物菌剂及其制备方法与应用。生物炭基固定化微生物菌剂包括生物炭基材料，以及生物炭基材料上吸附的菌体以及营养剂，所述菌体为分支杆菌CSC-6(Mycobacteriumsp.CSC-6)，在2017年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号是：CCTCCNo.M2017726。所述生物炭基固定化微生物菌剂用于降解石油。与现有技术相比，本发明通过固定吸附菌剂+营养剂的方式制备的菌剂对石油烃有较高的降解能力，降解含1.0wt％的石油的污水7天后，降解率可达83.5％，相比于单纯菌剂的降解率52.0％具有较大幅度的提高。同时，生物炭基固定化微生物菌剂更有利于活性菌的保存。CN109628353ACN109628353A权利要求书1/2页1.一株菌株，其特征在于，为分支杆菌CSC-6(Mycobacteriumsp.CSC-6)，该菌株在2017年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学，其保藏编号是：CCTCCNo.M2017726。2.一种生物炭基固定化微生物菌剂，其特征在于，包括生物炭基材料，以及生物炭基材料上吸附的菌体，所述菌体为如权利要求1中所述分支杆菌CSC-6(Mycobacteriumsp.CSC-6)。3.根据权利要求2所述一种生物炭基固定化微生物菌剂，其特征在于，还包括生物炭基材料上吸附的营养剂。4.根据权利要求3所述一种生物炭基固定化微生物菌剂，其特征在于，营养剂溶液包括以下含量比例的组分：油酸0.4-0.8mL，甘油1.0-3.0g，柠檬酸钠0.2-0.4g，磷酸氢二钠1.0-1.5g，磷酸二氢钾1.0-1.5g，硫酸铵0.5-1.0g，硫酸锌0.5-1.0mg，氯化钙0.5-1.0mg，硫酸铜0.5-1.0mg，硫酸镁15-25.0mg。5.根据权利要求3所述一种生物炭基固定化微生物菌剂，其特征在于，所述生物炭基材料包括生物炭。6.一种如权利要求2或3所述生物炭基固定化微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：挑取如权利要求1所述菌株活化，取活化后的菌液扩大培养得到种子液，将种子液发酵培养后，脱水得到浓缩菌液；将浓缩菌液加入含有生物炭基材料的液体培养基，混合吸附后，脱水去除多余的培养基初步得到生物炭基菌剂，将该生物炭基菌剂加入营养剂吸附，制得最终所述生物炭基固定化微生物菌剂。7.根据权利要求6所述生物炭基固定化微生物菌剂的制备方法，其特征在于，每100g生物炭基材料使用的浓缩菌液是1g，使用的营养剂溶液是50g。8.根据权利要求6所述生物炭基固定化微生物菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：(一)使用接种环从保存分支杆菌CSC-6(Mycobacteriumsp.CSC-6)的LB固体平板上，挑取一环菌株接种于5-10mL的1#液体培养基中，在20-35℃，转速为120-150r/min的振荡培养箱中活化24-48h；(二)按照体积比1-5％的接种量取活化后菌液接种于2#液体培养基中，在20-35℃，转速为120-150r/min的振荡培养箱中扩大培养24-48h，得到种子液；(三)按照体积比5-10％的接种量取种子液加入到装有2#液体培养基的5.0L的发酵罐中，培养条件为：通风比0.4-0.8vvm，搅拌速度200-300r/min，温度20-35℃，pH7.2-7.4，发酵时间24-48h，发酵结束后，在5000-8000r/min的高速离心机上离心，去除发酵液，获得1#菌剂；(四)将1#菌剂按照体积比0.1-0.25％的量加入3#液体培养基中，在20-35℃，转速为120-150r/min的振荡培养箱中培养2-8h后，加入10-50％的生物炭载体，继续振荡12-24h后，使用碟式离心机去除多余