肠杆菌科细菌质粒介导的AmpC-β-内酰胺酶的研究.doc

肠杆菌科细菌质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶的研究细菌耐药已成为全球公共卫生的一大难题。肠杆菌科细菌为医院内感染的常见病原菌,尤其是携带有AmpCβ-内酰胺酶的细菌,对几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药,且对β-内酰胺酶抑制剂不敏感,对头孢西丁亦耐药。目前没有国际统一的检测标准,没有临床大规模监测数据,人类对其还缺乏足够的认识。这类基因被质粒获取后,可以在不同菌种之间传播,加之各种可移动基因原件的参与,使耐药基因的传播复杂多样,给感染控制带来极大的困境。本研究搜集澳大利亚西悉尼4家医院,3年内对头孢西丁耐药的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌83株,用多重PCR的方法检测不同类型的ampC耐药基因,测序确定基因分型;脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行菌株分型;质粒接合实验及电穿孔获取质粒,然后应用质粒不相容分型PCR方法进行质粒分型;应用PCRmapping的方法了解该基因上下游结构,从基因水平了解该耐药基因的传播机制。结果:83株头孢西丁耐药的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌中14株携带有ampC基因;测序及基因库比对结果显示7株为bla_DHA-1基因,5株为bla_CMY-2基因。且发现两个新型耐药基因,一个已经命名为bla（CMY-42）,另一株bla_DHA-1-like基因还需进一步深入研究。PFGE结果显示各菌株均为不同类型;发现几种不同类型质粒参与耐药基因的传播;除一株外,所有bla_DHA-1-like基因都连接有qnrB4基因。bla_DHA-1基因与ISCR1或IS26相连,bla_CMY-2及bla_CMY-42基因均与ISEcp1及IS26相连;pJIE092可能为pJIE142及基因库中收录的来自法国等国家基因结构的前体。结论:在澳大利亚西悉尼的质粒介导的ampC基因为已知的世界上较为流行的bla_DHA-1及bla_CMY-2基因型,并发现携带一种新型ampC耐药基因bla_CMY-42,及另外一种正进一步研究的新型ampC耐药基因bla_CMY-42基因。并非单一克隆传播,亦非单一质粒传播,有多种移动基因元件参与ampC耐药基因的传播。并发现一种相对古老的基因结构。