丙泊酚预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及机制研究.doc

丙泊酚预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及机制研究脑血管疾病是目前具有高发病率和死亡率的主要原因之一，严重危害人类的健康，给各国政府财政造成严重的经济负担，其中缺血性脑血管病占约80-85%，而脑缺血及缺氧为其主要特征，临床上可通过溶栓等治疗手段能及时恢复缺血区血液供应，随之可能继发严重的脑缺血再灌注损伤，目前尚缺乏针对缺血再灌注损伤特别有效的临床治疗手段。去乙酰化酶Sirtuin是一个在低等动物中被广泛研究的抗衰老蛋白因子，哺乳动物的同源蛋白家族SIRT3蛋白定位于线粒体，近期研究表明：SIRT3在调控细胞代谢及抗通过氧化机制防御氧自由基氧化应激介导损伤具有重要作用。麻醉学作为一门围术期医学，不仅为现代外科手术提高舒适与安全，目前研究表明，丙泊酚（propofol，Pro）参与术中脏器保护，Pro后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显脑保护作用，并可干预细胞凋亡过程，本研究通过TUNEL染色及免疫组化染色方法检测沉默信息调节因子3(silentinformationregulation2homolog3,SIRT3)了解Pro预处理的脑保护机制，并初步了解Pro预处理脑保护时间窗。研究分为三部分：第一部分：二种神经功能评分评价大鼠局灶性脑缺血模型的初步研究目的：探讨GarciaJH和Bederson2种神经功能评分对大鼠局灶性脑缺血模型的评价意义。方法：16只大鼠采用线栓法阻塞大脑中动脉建立局灶脑缺血再灌注模型，24h后分别采用GarciaJH和Bederson2种神经功能评分方法进行评价，并行TTC染色法测定脑梗死体积百分比(BIVP),应用Spearman相关分析判断神经功能评分与BIVP的相关性。结果：16只大鼠行大脑中动脉阻塞模型术后存活15只，GarciaJH评分与BIVP呈显著负相关(r=-0.930,P<0.001)，Bederson评分与BIVP呈显著正相关(r=0.794,P<0.001)。结论：GarciaJH评分及Bederson评分均可作为局灶性脑缺血模型行为学评价指标，前者可能更适合。第二部分：丙泊酚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究目的：探讨丙泊酚(Pro)预处理(Pc)对局灶性脑缺血再灌注损伤是否具有保护作用。方法：雄性SD大鼠56只，随机均分为7组：缺血再灌注组(I-R组)、脂微球溶剂组（LM组）、PC-6h组、PC-12h组、Pc-24h组、PC-48h组和PC-72h组，分别于脑缺血前6、12、24、48及72h给予后五组选择剂量Pro50mg.kg-1.h-1行单次预处理，LM组尾静脉注射脂微球溶剂1ml/kg，I-R组尾静脉注射等容量生理盐水，采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型，于再灌注24h行神经功能缺损评分（NDS评分）及脑梗死容积比(BIVP)测定。结果：脑缺血前6、12、24及48h单次给予选择剂量50mg.kg-1.h-1Pro进行预处理后各组脑缺血再灌注后24hNDS均较I-R组有明显改善(P<0.05)，且BIVP明显缩小(P<O．05)。结论：Pro预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤可产生保护作用，预处理脑保护效应时间窗长达48h。第三部分：丙泊酚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用机制的实验研究目的：探讨丙泊酚(Pro)预处理(Pc)对局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的可能机制。方法:健康成年雄性SD大鼠64只，体重250-300g，随机分成4组(n=16)：假手术组(S组),脑缺血再灌注组(IR组),脂微球溶剂组（LM组）,Pc-24h组,其中Pc-24h组于脑缺血前24h给予剂量Pro50mg.kg-1.h-1行单次预处理，LM组尾静脉注射脂微球溶剂1ml/kg，S组及I-R组尾静脉注射等容量生理盐水，采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型，缺血90min，再灌注24h。大鼠清醒后，进行神经功能缺陷评分。再灌注24h时处死大鼠，处死后取脑组织，测定含水量，并应用免疫组织化学法、原位末端标记法，检测脑组织SIRT3阳性细胞数及凋亡细胞数。结果：与S组比较，IR组、LM组和Pc-24h组NDS评分下降、脑组织含水量、凋亡细胞数及SIRT3阳性细胞数增加(P<0．05)；与IR组及LM组比较，Pc-24h组NDS评分增加(P<0．05)，而脑组织含水量和凋亡细胞数减低(P<0．05)，SIRT3表达上调(P<0．05)。结论：Pro预处理可能通过诱导SIRT3蛋白表达上调、抑制脑缺血再灌注后细胞凋亡进程，减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。