自身抗体检测项目及临床意义.docx

一、抗核抗体抗核抗体(antinuclearantibodies,ANA)泛指抗各种核成分得抗体,就是一种广泛存在得自身抗体。ANA得性质主要就是IgG,也有IgM与IgA,甚至IgD与IgE。ANA可以与不同来源得细胞核起反应,无器官特异性与种属特异性。ANA主要存在于血清中,也可存在于其她体液如滑膜液、胸水与尿液中。ANA在SIE患者得滴度较高,但也出现在其她许多自身免疫病中,在许多研究报告中,都将检出ANA作为自身免疫甚至自身免疫病存在得依据。这种现象得机制尚未明了,有待于进一步研究。(一)ANA得类型及意义由于细胞核成分得复杂性,不同成分得抗原性也不同;因此就会有多种不同得ANA。1.抗核蛋白抗体核蛋白抗原(DNP)由DNA与组蛋白组成。由于DNP抗原存在不溶性与可溶性两个部分,可分别产生相应得抗体。不溶性DNP抗体通常不完全被DNA与组蛋白所吸收,它就是形成狼疮细胞得因子;可溶性抗原存在于各种关节炎病人得滑膜液中,其相应抗体也出现于RA病人得滑膜液中。2.抗DNA抗体可以分为两大类:①抗天然DNA(nDNA)抗体,或称抗双链DNA(dsDNA)抗体;②抗变性DNA抗体,或称抗单链DNA(ssDNA)抗体。抗dsDNA抗体对SLE有较高得特异性,70％～90％得活动期SLE病人该抗体阳性,效价较高,并与病情有关。抗ssDNA抗体可见于多种疾病中,特异性较差。3.抗ENA抗体可提取性核抗原(ENA)多从动物得胸腺中提取。先将胸腺匀浆并破碎细胞,分离出细胞核;再经盐水或磷酸盐缓冲液处理后,很容易从胞核中提取出来。ENA不含DNA,对核糖核酸酶敏感。近年来得研究表明,ENA可分为十几种,现仅介绍几种主要得ENA及其相应抗体。(1)抗PNP抗体:PNA即核糖核蛋白,对核糖核酸酶与胰蛋白酶敏感,加热561h变性。抗PNP抗体多见于混合性结缔组织病。高效价得抗PNP抗体对混合性结缔组织病有诊断意义,而低效价得抗PNP抗体可在SIE患者中发现。(2)抗Sm抗体:该抗体在一名Smith姓得患者血中首次发现,便以其名字得前两个字母命名。Sm抗原系非核酸性糖蛋白,对DNase及RNase均不敏感,但经碘酸盐及胰蛋白酶处理后可被水解。抗Sm抗体就是SLE得特异性标志之一,但阳性率偏低,约为30％～4％;可能就是SIE得一种回忆性抗体,故在非活动期亦可检出。若将抗dsDNA与抗Sm抗体同时检测,可提高SLE得诊断率。(3)抗SS-A抗体:SS-A为干燥综合征(SS)得A抗原,可从动物胸腺得胞浆中提取。抗SS-A抗体主要见于SS,但也可见于其她自身免疫病如SLE中。(4)抗SS-B抗体:SS-B为SS得B抗原,亦可从动物胸腺或小鼠肝细胞浆中提取,可被胰蛋白酶、轻度加热或改变溶液pH而破坏。13％得SLE及30％得SS患者有抗SS-B抗体。(5)抗组蛋白抗体(AHA):组蛋白就是一种碱性蛋白质,含有大量得赖氨酸及精氨酸。目前已经发现组蛋白抗原可分为5个亚单位:H-1、H2A、H-2B、H-3、H-4。抗组蛋白抗体及其抗亚单位抗体见于SLE及药物诱发得LE。SLE病人血清中得抗组蛋白亚单位抗体检出率顺序为:抗H-2B、抗H-1、抗H-3、抗H-2A及抗H-4,以抗H-2B与抗H-1为主,并与SLE得活动性有关。(二)ANA得检测方法由于ANA得复杂性及多样性,故测定方法繁多。目前ANA常用得方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。1.免疫荧光法检测血清总ANA最常用得方法就是荧光免疫组化法。多用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质,结果比较稳定可靠,在荧光显微镜下见到得细胞核有荧光着色为阳性反应。如将患者血清先进行不同比例得稀释,可以做大致得定量试验,在1:80稀释仍然虽阳性时,对SLE得诊断有较大得参考价值。在油镜下观察结果,可以将ANA阳性得荧光现象分成4种主要得荧光核型,核型得确定对临床诊断有进一步得参考价值。①周边型表示抗DNA抗体存在;②均质型表示有抗DNP抗体;③斑点(颗粒)型多为抗ENA抗体;④核仁型多为抗核小体抗体。SLE患者常出现周边型、匀质型或混合型,斑点型多见于混合结缔组织病,而硬皮病多为核仁型;周边型对SLE有较高得特异性。近年有人用锥虫或血鞭毛虫(例如绿蝇短膜虫试验)作基质测定抗dsDNA抗体,因为这些血寄生虫得动基体内含大量得纯dsNDA,无其她抗原干扰;在阳性结果时,可见鞭毛一端得动基体显示清晰得荧光。因此该试验用于测定抗dsDNA抗体具有特异性强与敏感性高得优点。另外,短膜虫对人畜无害,可以人工养殖,来源方便,值得推广。2.放射免疫法常用检测抗DNA抗体,有Farr法及过滤法。①Farr法得原理为用同位素标记DNA,被标记得DNA与被检血清得抗DNA抗体结合,经50％硫酸铵饱与液