栗色鼠尾草转录因子ScWRKY35基因及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116004659A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202211664608.5A01H5/00(2018.01)(22)申请日2022.12.23A01H6/50(2018.01)C12N15/74(2006.01)(71)申请人浙江理工大学C12N1/21(2006.01)地址310018浙江省杭州市下沙2号大街C12R1/01(2006.01)928号浙江理工大学生命科学与医药学院(72)发明人许玲孙月娥郝瑞勇许孜书段怡(74)专利代理机构杭州初尘专利代理事务所(特殊普通合伙)33514专利代理师万静(51)Int.Cl.C12N15/29(2006.01)C07K14/415(2006.01)C12N15/82(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称栗色鼠尾草转录因子ScWRKY35基因及其应用(57)摘要本发明提供了栗色鼠尾草转录因子ScWRKY35基因及其应用，该基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本发明采用生物信息学、分子生物学等方法对栗色鼠尾草WRKY家族成员的种类、结构特征进行了分析，从已测转录组数据中获得完整的ScWRKY35序列，根据序列设计引物克隆该基因，并将该基因转入同属植物丹参中，获得带有ScWRKY35基因的转基因毛状根，发现ScWRKY35基因参与调控酚酸类物质生物合成途径上关键酶基因的表达，提高了酚酸类物质的含量。CN116004659ACN116004659A权利要求书1/1页1.栗色鼠尾草转录因子ScWRKY35基因，其特征在于，该基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.包含权利要求1所述的转录因子ScWRKY35基因的重组表达载体。3.如权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，表达载体为pCAMBIA1300‑eGFP。4.包含权利要求1所述的转录因子ScWRKY35基因的基因工程菌。5.栗色鼠尾草转录因子ScWRKY35基因的编码蛋白，其特征在于，所述转录因子的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。6.如权利要求1所述的栗色鼠尾草转录因子ScWRKY35基因，权利要求2所述的重组表达载体，或权利要求4所述的基因工程菌在提高植物酚酸类物质含量中的应用。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述植物为丹参。8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的酚酸类物质为丹酚酸B。9.一种提高丹参毛状根中酚酸类物质含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用基因克隆的方法获得栗色鼠尾草转录因子ScWRKY35基因；(2)将ScWRKY35基因插入表达载体中，获得ScWRKY35基因的过表达载体；(3)将ScWRKY35基因的过表达载体转化发根农杆菌感受态，获得重组农杆菌，并侵染丹参叶片，得到转基因丹参植株。2CN116004659A说明书1/4页栗色鼠尾草转录因子ScWRKY35基因及其应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种来源于栗色鼠尾草的转录因子ScWRKY35基因及其应用。背景技术[0002]丹参是一种常用的大宗药材之一，主要活性成分为脂溶性丹参酮类和水溶性酚酸类物质，其入药部位是根，常用于治疗心脑血管疾病。丹参酮类和酚酸类物质具有重要的药用价值，且丹参药材需求量很大，如何提高药材的品质，提高药用成分含量受到了极大的关注。[0003]WRKY是植物十大转录因子家族之一，广泛参与植物的生长、发育、生物或非生物胁迫响应等多种生理过程，已有研究发现该家族成员参与多种次生代谢物合成的调控，然而，有关栗色鼠尾草中WRKY转录因子是否调控次生代谢物的合成却知之甚少。[0004]Suttipanta对过表达CrWRKY1的毛状根研究发现，与TIAs生物合成相关的关键酶基因TDC、ZCT1、ZCT2、ZCT3的表达量提高，说明CrWRKY1很可能参与TIAs的生物合成(Suttipanta,N.,Pattanaik,S.,Kulshrestha,M.,etal.TheTranscriptionFactorCrWRKY1PositivelyRegulatestheTerpenoidIndoleAlkaloidBiosynthesisinCatharanthusroseus.PlantPhysiology,2011,157:2081‑2093.)。在番茄(Solanumlycopersicum)中，SlWRKY73可以激活3个单萜合成基因SlTPS5、SlTPS3、SlTPS7的表达，从而调控萜类的生物合成(Spyropoulou,E.A.,Haring,M.A.,Schuurink,R.C.RNAsequencingonSolanumlyc