淀粉酶活性的测定-(2).doc

(完整word版)淀粉酶活性的测定(2)(完整word版)淀粉酶活性的测定(2)(完整word版)淀粉酶活性的测定(2)淀粉酶活性的测定原理淀粉酶(amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。淀粉酶产生的这些还原糖能使3,5－二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3－氨基－5－硝基水杨酸。淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。可以用麦芽糖制作标准曲线，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。几乎所有植物中都存在有淀粉酶,特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强,主要是α－和β－淀粉酶。Α－淀粉酶不耐酸，在pH3。6以下迅速钝化；而β－淀粉酶不耐热，在70℃15min则被钝化。根据它们的这种特性,在测定时钝化其中之一，就可测出另一个的活力。本实验采用加热钝化β－淀粉酶测出α－淀粉酶的活力，再与非钝化条件下测定的总活力（α＋β）比较，求出β－淀粉酶的活力。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：萌发的小麦种子(芽长约1cm)。(二）仪器设备：1.分光光度计；2.离心机；3.恒温水浴（37℃，70℃，100℃）;4.具塞刻度试管；5。刻度吸管；6。容量瓶。（三)试剂(均为分析纯)：1.标准麦芽糖溶液（1mg/ml）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml；2.3，5－二硝基水杨酸试剂：精确称取1g3，5－二硝基水杨酸，溶于20ml2mol/LNaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。盖紧瓶塞,勿使CO2进入。若溶液混浊可过滤后使用;3.01mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液：A液（0。1mol/L柠檬酸）:称取C6H8O7。H2O21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L;B液(0.1mol/L柠檬酸钠)：称取Na3C6H5O7。2H2O29。41g，用蒸馏水溶解并定容至1L。取A液55ml与B液145ml混匀，即为0.1mol/LpH5。6的柠檬酸缓冲液；4。1%淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100ml0。1mol/LpH5。6的柠檬酸缓冲液中。三、实验步骤（一）麦芽糖标准曲线的制作：取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表（详教材）加入试剂。摇匀，置沸水浴中煮沸5min.取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20ml.以1号管作为空白调零点,在540nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横座标，吸光度值为纵座标,绘制标准曲线。（二)酶液制备：称取1g萌发3天的小麦种子（芽长约1cm），置于研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨成匀浆。将匀浆倒入离心管中，用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管.提取液在室温下放置提取15～20min,每隔数min搅动1次,使其充分提取。然后在3000rpm下离心10min，将上清液倒入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液10ml，放入50ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀，即为淀粉酶稀释液.(三）酶活力的测定：取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表（详教材）进行操作。(四）结果计算：淀粉酶活力=C×VT/（W×Vs×T)(mg/g/min)。式中，C为从标准曲线上查得的麦芽糖含量（mg）；VT为淀粉酶原液总体积（ml）；Vs为反应所用淀粉酶原液体积(ml）;W为样品重量(g）；t为反应时间（min)。淀粉酶淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料,由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维.淀粉酶的种类很多,根据织物不同，设备组合不同，工艺流程也不同，目前所用的退浆方法有浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等,由于淀粉酶退浆机械作用小，水的用量少，可以在低温条件下达到退浆效果，具有鲜明的环保特色。