一种非病毒基因载体及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103320471A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103320471103320471A(43)申请公布日2013.09.25(21)申请号201310260473.0(22)申请日2013.06.26(71)申请人中国科学院长春应用化学研究所地址130022吉林省长春市人民大街5625号(72)发明人田华雨王萍陈学思郭兆培(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵李玉秋(51)Int.Cl.C12N15/85(2006.01)C12N15/87(2006.01)C08G73/04(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书10页说明书10页附图5页附图5页(54)发明名称一种非病毒基因载体及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种非病毒基因载体，包括超支化聚乙烯亚胺、金银合金纳米颗粒；所述金银合金纳米颗粒以硫金键和硫银键与超支化聚乙烯亚胺结合。本发明提供的非病毒基因载体能够与基因物质较好的复合，将基因物质导入细胞进行表达，并实现治疗的目的。在本发明中，超支化聚乙烯亚胺与基因物质能够良好的复合，且金银合金纳米颗粒能够促进基因的转染，提高了基因的转染效率。而且，本发明提供的非病毒基因载体具有较强的发光性能与光稳定性能，能够用于荧光标记，有利于对基因物质在体内的示踪。CN103320471ACN103247ACN103320471A权利要求书1/1页1.一种非病毒基因载体，包括超支化聚乙烯亚胺和金银合金纳米颗粒；所述金银合金纳米颗粒以硫金键和硫银键与超支化聚乙烯亚胺结合。2.根据权利要求1所述的非病毒基因载体，其特征在于，所述超支化聚乙烯亚胺的数均分子量为300～30000。3.根据权利要求1所述的非病毒基因载体，其特征在于，所述金银合金纳米颗粒的质量与所述超支化聚乙烯亚胺的质量比为1:100～100:1。4.根据权利要求1所述的非病毒基因载体，其特征在于，所述金银合金纳米颗粒中金银的摩尔比为1:100～100:1。5.根据权利要求1所述的非病毒基因载体，其特征在于，所述金银合金纳米颗粒的粒径为1nm～20nm。6.一种非病毒基因载体的制备方法，包括以下步骤：a）在冰浴条件下，将硫辛酸、N-羟基琥珀酰亚胺和N,N’-二环己基碳二亚胺在有机溶剂中进行反应，再在20℃～45℃下反应，得到活化后的硫辛酸；b）将所述活化后的硫辛酸与聚乙烯亚胺在有机溶剂中反应，得到连接有硫辛酸的聚乙烯亚胺；c）将所述连接有硫辛酸的聚乙烯亚胺与硝酸银、氯金酸和还原剂混合，反应后得到非病毒基因载体。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述硫辛酸、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N’-二环己基碳二亚胺与聚乙烯亚胺的质量比为（1～500）:（1～300）:（1～500）:（10～5000）。8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a）中在20℃～45℃下反应的时间为12h～24h。9.一种非病毒基因载体复合物，包括权利要求1～5任意一项所述的非病毒基因载体或权利要求6～8任意一项所述制备方法得到的非病毒基因载体和基因物质。10.根据权利要求9所述的非病毒基因载体复合物，其特征在于，所述非病毒基因载体与基因物质的质量比为0.1:1～100:1。2CN103320471A说明书1/10页一种非病毒基因载体及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及基因治疗技术领域，尤其涉及一种非病毒基因载体及其制备方法。背景技术[0002]随着人类基因组计划的迅速发展，人们对生命基因基础的认识达到了一个新的水平，对遗传病等对人类生命有重大威胁的疾病的治病原因也有了更全面的认识。基因治疗是伴随DNA重组技术而发展起来的一种治疗手段，它是指用正常或野生型基因矫正或置换致病基因的一种治疗方法。基因治疗不仅可以治疗遗传病，如血友病、囊性纤维病、家庭性高胆固醇血症等，现在已可以治疗肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病、传染病等各个领域。近年来国内外对多种疾病致病基因的研究发展迅速，为基因治疗发展提供了坚实的理论基础和技术条件，使基因治疗有望成为攻克人类顽疾的一种有效方法。[0003]将基因物质导入细胞进行表达并且实现治疗的目的，离不开基因载体对基因物质的运载。最开始应用也是应用最广泛的基因载体是病毒类基因载体，其中包括逆转录病毒、腺病毒（AV）、腺相关病毒（AAV）、单纯疱疹病毒（HSV）、痘苗病毒（VV）等载体。然而，病毒类基因载体有着对外源基因的容纳少，稳定性差，会引起免疫系统的反应等缺点，并且病毒类基因载体的应用有着潜在的不安全因素，已经发生了由于病毒类基因载体引发的医疗事故。[0004]所以现在常用安全、有效、无免疫原性的非病毒类基因载体来代替病毒类基因载体对基因物质