一种氧化还原响应超支化聚壳多糖及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109942826A(43)申请公布日2019.06.28(21)申请号201910273076.4(22)申请日2019.04.04(71)申请人大连民族大学地址116600辽宁省大连市经济技术开发区辽河西路18号(72)发明人张树彪陈会英马羽蓝浩铭范雪枫(74)专利代理机构大连智高专利事务所(特殊普通合伙)21235代理人祝诗洋(51)Int.Cl.C08G81/00(2006.01)A61K47/36(2006.01)A61K48/00(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图3页(54)发明名称一种氧化还原响应超支化聚壳多糖及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种氧化还原响应超支化聚壳多糖及其制备方法和应用。本发明采用含二硫键的双官能团试剂交联低分子量超支化聚合物，然后在该交联超支化聚合物骨架上接枝壳多糖，制备了含二硫键的超支化高分子骨架为内核、壳多糖为端基的氧化还原响应超支化聚壳多糖。本发明提供的氧化还原响应超支化聚壳多糖具有特殊的超支化结构，克服了原有线型壳聚糖的结构局限性，同时由于超支化聚壳多糖外围为pKa约6.5的壳多糖具有pH敏感电荷反转和氧化还原降解的环境响应特征。该环境响应超支化壳聚糖表现出优良的生物相容性和高效的基因递送性能，在基因治疗和基因编辑领域具有广阔的应用前景。CN109942826ACN109942826A权利要求书1/1页1.一种氧化还原响应超支化聚壳多糖的制备方法，其特征在于，首先将3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺)酯或者胱胺双丙烯酰胺双官能团偶联试剂溶解于二甲亚砜或者甲醇溶剂，搅拌状态下，缓慢滴加低分子量超支化聚乙烯亚胺、超支化聚酰胺胺、超支化聚赖氨酸中的一种的溶液，20～50℃反应0.5～5h，将反应液透析纯化并冷冻干燥，制备得到氧化还原超支化高分子骨架；然后将二酸二琥珀酰亚胺酯双官能团偶联试剂溶解于甲醇或者二甲亚砜溶剂，搅拌状态下，缓慢滴加1-5％壳多糖水溶液或DMF或DMSO，20～50℃反应0.5～5h，再缓慢滴加上述氧化还原超支化高分子骨架的水溶液，继续在20～50℃反应0.5～5h后，将反应液透析并经冷冻干燥，制备得到氧化还原响应超支化聚壳多糖。2.根据权利要求1所述的氧化还原响应超支化聚壳多糖的制备方法，其特征在于，所述壳多糖的分子量Mw为300-3500Da，聚合度2-20；脱乙酰度为65-95％。3.根据权利要求1所述氧化还原响应超支化聚壳多糖的制备方法，其特征在于，所述氧化还原超支化高分子骨架内核由低分子量超支化聚乙烯亚胺、超支化聚酰胺胺、超支化聚赖氨酸中的一种通过二硫键交联形成，分子量Mw＝600～5000。4.根据权利要求1所述的氧化还原响应超支化聚壳多糖的制备方法，其特征在于，所述二酸二琥珀酰亚胺酯双官能团偶联试剂为双琥珀酰亚胺辛二酸酯、双琥珀酰亚胺己二酸酯、双琥珀酰亚胺丁二酸酯中的一种或几种，二酸二琥珀酰亚胺酯双官能团偶联试剂或壳多糖的用量为超支化聚合物重复单元摩尔当量的0.1-1倍，反应条件为20-50℃搅拌反应0.5～5h。5.一种氧化还原响应超支化聚壳多糖是按照权利要求1所述方法制备的。6.如权利要求1所述的氧化还原响应超支化聚壳多糖在药物基因载体上的应用。2CN109942826A说明书1/10页一种氧化还原响应超支化聚壳多糖及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及一种氧化还原响应超支化聚壳多糖的药物和基因载体，具体地说，涉及一种氧化还原响应兼具pH响应的超支化壳多糖缀合物及其在基因药物递送领域的应用，属于药物递送领域新型药物载体的制备方法与技术。背景技术[0002]基因治疗通过将外源基因导入到靶细胞内以修复导致疾病的缺陷基因或者抑制导致疾病的有害基因，从而使机体恢复正常功能，达到治疗疾病的目的【1.中国发明专利，授权号ZL201010601008.5，发明名称为：用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物及其制备和应用】。基因治疗技术为常规医疗手段难以治愈的疾病提供了新的治疗方法。基因编辑是指通过精确识别目标DNA片段中的靶点核苷酸序列，利用核酶内切酶等手段进行切割，形成DNA双链断裂，利用细胞体内的天然修复机制，完成基因敲出、插入和置换。分子生物学的发展和基因编辑技术的成熟，推动了基因治疗的临床应用，使其不仅在治疗遗传性先天疾病和恶性肿瘤等领域发挥优势，并且越来越广泛的应用于各种普遍性疾病的治疗。对于基因治疗和基因编辑来讲，临床应用的关键仍然在于开发安全、高效的基因递送载体。[0003]壳多糖作为自然界中为数不多的碱性多糖，因具有良好的生物相容性和生物降解性，以及强的基因压缩能力，作为基因递送载体被广泛研究，然而壳多糖在生理pH条件下