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本发明涉及一种同时检测肺炎衣原体和沙眼衣原体DNA的试剂盒,所述引物组、探针组及试剂盒可实现一次反应同时检测肺炎衣原体和沙眼衣原体DNA,是目前少见的同时检测两种衣原体的试剂盒,效率高、特异性强,为临床检验提供辅助诊断的依据;通过本技术方案的公开,可以为非典型性病原体的鉴别诊断提供新的手段。