高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素的含量.docx

高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素的含量高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素的含量【摘要】目的建立高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素含量的方法。方法采用HypersilBDSC18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)，流动相为甲醇?水?磷酸(体积比50∶50∶0.2)，检测波长为370nm。结果槲皮素在0.08～0.32μg的范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9996)，平均加样回收率为101.5%，RSD为0.8%(n=6)。结论本法快速、简便、准确，可用于测定白花蛇舌草中槲皮素的含量，为评价白花蛇舌草的内在质量提供科学依据。【关键词】白花蛇舌草槲皮素含量测定高效液相色谱法Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofquercetininHedyotisdiffusaWilld.MethodsTheanalysiswasperformedonanHPLCC18column(4.6mm×200mm，5μm)atthedetectionwavelengthof370nm.Themobilephaseconsistedof0.2%phosphoricacid?methanol(50∶50)withaflowrateof1mL/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.08-0.32μgofquercetin(r=0.9996).Theaveragerecoverywas101.5%withRSD0.8%(n=6).ConclusionThemethodissimple，rapidandaccurateforthedeterminationofquercetininHedyotisdiffusaWilld,whichcouldbeusedforthequalitycontrolofHedyotisdiffusaWilld.Keywords:HedyotisdiffusaWilld.;quercetin;HPLC白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草(HedyotisdiffusaWilld.)的干燥全草，研究表明该植物主要含有黄酮类、三萜类、蒽醌类、环烯醚苷萜类、甾醇类、烷烃类等化学成分，具有抗肝炎、抗肿瘤、抗病毒、抗炎抑菌、降血脂及降血糖等多种药理活性[1]。白花蛇舌草中黄酮类化合物的含量测定未见文献报导，本文采用HPLC法测定了白花蛇舌草中槲皮素的含量，为评价白花蛇舌草的内在质量提供科学依据。1、仪器与药品高效液相色谱仪：P230高压恒流泵/DAD230二极管阵列检测器(大连依利特分析仪器有限公司)，HypersilBDSC18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm，大连依利特分析仪器有限公司);电子精密天平(Ohaus);KS?1500超声清洗器(宁波科胜仪器厂);高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。白花蛇舌草(市售，批号2006001，2006002，2006003)，经本校药植教研室陈再兴老师鉴定均为白花蛇舌草(HedyotisdiffusaWilld.);槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号100081-200406，供含量测定用);甲醇为色谱纯;水为重蒸水。2、结果与分析2.1色谱条件色谱柱：HypersilBDSC18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)，流动相：甲醇?水?磷酸(体积比50∶50∶0.2);检测波长：370nm，流速：1mL/min，柱温：25℃，进样量：20μL。色谱图见图1、2。2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1mL含槲皮素10μg的溶液，即得。2.3样品溶液的制备取白花蛇舌草药材粗粉1.0g，精密称定，置烧瓶中，精密加入50%(体积分数)甲醇20mL和盐酸1mL，密塞，称定重量，加热回流2h，放冷，用50%(体积分数)甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。2.4系统适用性试验分别取对照品溶液、供试品溶液各20μL进样测定，理论塔板数为15000，供试品溶液色谱图中槲皮素峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5。2.5线性关系的考察精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品10.0mg，加甲醇定容至100mL，分别精密量取上述对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度的溶液。分别精密吸取各溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以槲皮素峰面积(A)为纵坐标，槲皮素进样量(m)为横坐标，绘制准曲线，得回归方程为A=274.79m+54.43，r=0.