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本发明公开了一种从雄烯二酮发酵废液中回收雄烯二酮工艺,包括按照料液比1:2向雄烯二酮发酵废料中加入碱性清洗剂,清洗乳化剂、水溶性杂质、水溶性色素和部分油脂,然后水洗得沉淀物,将沉淀部分按重量加入6倍无水甲醇超声溶解5min,离心去除沉淀杂质,离心上清液调节甲醇浓度75?80%,离心去除下部黑色油状物,浓缩甲醇萃取物,加入乙酸乙酯:石油醚=1:0.5结晶,结晶物用甲醇重结晶4次,得高纯度4?AD。本发明克服了皂化、膜处理、树脂纯化的不足,能够高效地从雄烯二酮发酵废料中回收雄烯二酮,不仅实现了废物再回收利用的效果,也为企业创造了额外的经济效益。