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本发明涉及一种从芡实蛋白粉中制备活性多肽的方法及活性多肽和应用。所述方法包括步骤(1)去离子水提取、步骤(2)碱提取、步骤(3)酸提取、步骤(4)Tris?HCl提取、步骤(5)醇提取、步骤(6)酶解,制得的芡实活性多肽,用于制备食品、保健食品及特殊医学用途配方食品之中。本发明在此工艺条件下,芡实水解蛋白度高达45.7%,多肽得率为37.9%,水解产物的羟基自由基清除率为65.1%,超氧阴离子自由基清除率为45%。该生产工艺操作简单、条件温和,对芡实蛋白水解情况好,抗氧化活性多肽得率高,酶解程度可控,为芡实蛋白的深加工和综合利用提供了有效借鉴。