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本发明涉及一种小麦蛋白源硒螯合肽的制备方法,属于功能食品加工技术领域,包括如下步骤:(1)酶解:将麦胚蛋白粉加水调成悬浮液,加入碱性蛋白酶酶解后冷却后离心,收集上清液;(2)超滤:选择截留分子量为3000Da的超滤膜除去大分子物质,收集透过液,冻干备用;(3)螯合柱制备:制备壳聚糖金属螯合亲和层析柱,使填料充分吸附Se4+;(4)分离:将麦胚蛋白酶解物通过固定金属亲和层析柱,洗脱金属螯合肽,收集各组分,冷冻干燥;(5)纯化:利用半制备RP?HPLC?C18反相高效液相色谱再进一步分离,采用LC/MS液质联用质谱仪分析得出保留时间为13.85min处的峰为所述硒螯合特征肽;该方法制备的小麦蛋白源硒螯合肽,能有效提高硒的利用率,天然安全无毒副作用。