浅谈HPLC法测定复方灵芝颗粒中五味子甲素的含量.docx

浅谈HPLC法测定复方灵芝颗粒中五味子甲素的含量浅谈HPLC法测定复方灵芝颗粒中五味子甲素的含量摘要:目的建立复方灵芝颗粒中五味子甲素含量测定的方法。方法用高效液相色谱法测定，色谱条件为：C18柱，(5μm,250×4.6mm)，流动相为甲醇水(体积比75∶25)，检测波长为254nm。结果五味子甲素在0.1608～6.432μg范围内呈现良好的线性关系(R=09996)，平均加样回收率为99.27%，RSD=1.02%(n=6)。结论该法操作简便、准确，重复性好，建立的定量方法可用于复方灵芝颗粒质量的控制。关键词:HPLC;复方灵芝颗粒;五味子甲素Abstract:ObjiectiveToestablishamethodforthecontentdeterminationofdeoxyschizandrinincomplexLingzhigranule.MethodsHPLCwasperformedonanODS-C18column(5μm,250mm×4.6mm)usingmethanolwater(75∶25)asthemobilephaseunderthedetectionwavelengthof254nm.ResultsThelinearrangeofdeoxyschizandrinwas0.1608-6.432μg.Themeanrecoverywas99.27%withRSD1.02%(n=6).ConclusionThismethodissimple,reproducibleandaccurateforthecontentdeterminationofdeoxyschizandrinincomplexLingzhigranule.Keywords:HPLC;complexLingzhigranule;deoxyschizandrin复方灵芝颗粒具有保护肝脏降低谷丙转氨酶和退黄作用，用于急性传染性黄疸肝炎，迁延性肝炎，慢性肝炎，单项谷丙转氨酶升高等症，其现行标准收载于中药部颁标准2册，该药由灵芝、柴胡、五味子和郁金4味药材组成，五味子为方中主药之一，为了提高及控制复方灵芝颗粒的质量，本文对五味子中的五味子甲素进行含量测定，建立质量标准。本方法简便，准确，重现性好。1仪器和试药日本岛津LC-10ATHPLC仪;N2000色谱工作站。甲醇(色谱纯，Merck公司出品);双蒸馏水(自制)，其他试剂为分析纯。五味子甲素标准对照品购于中国药品生物制品检定所(供含量测定用，批号为110764-200107)，复方灵芝颗粒(自制，批号：20050201、20050202、20050203、20050204)。2方法与结果1色谱条件的选择色谱柱:Inertsil(C18,5μm,250mm×4.6mm);检测波长：254nm;流动相：甲醇-水(75∶25),流速：1mL・min-1;进样量10μL;柱温：30℃。取一定浓度样品进行测定，此条件下所测五味子甲素与样品中其他组分色谱峰完全分离，色谱峰形对称而尖锐(拖尾因子T=1.00)，按五味子甲素峰计算，理论板数不小于2000。2阴性对照试验取处方量以相同工艺制备的阴性对照(缺五味子)，按上述方法测定，结果为：阴性对照色谱图中在与五味子甲素对照品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，结果表明阴性对照(含灵芝、柴胡和郁金三味药材)用相同制备方法下提取的成分在测定波长处无吸收，故其他成分其他对五味子甲素测定无干扰，见图1。3样品溶液制备3.1对照品溶液的制备取五味子甲素对照品1005mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度,摇匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液(40.2μg・mL-1)。2.3.2供试品溶液的制备取本品约4g，研细，精密称定，置100mL锥形瓶中，加氯仿约40mL，超声处理30min，滤过，残渣加氯仿30mL，超声处理30min，滤过，合并两次滤液，将容器和滤纸多次洗涤液并入滤液中，挥干,残渣加甲醇溶解并转移置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。4线性关系考察精密吸取五味子甲素对照品贮备液(0.402mg・mL-1)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL，置5mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别取上述对照品溶液各10μL进样，按上述色谱条件测定，以峰面积(A)为纵坐标，进样量(m)为横坐标，进行线性回归，得回归方程A=1194733m+59047，r=0.9996。其线性范围为0.402～6.432μg，结果表明在此范围内呈良好