食品中霉菌和酵母菌测定的统一标准操作作业规程.doc

xxxxx食品中霉菌和酵母菌测定标准操作规程编号起草人日期审核人日期同意人日期实施日期第版文件密级1目标规范食品中霉菌和酵母菌测定标准操作规程。2范围本标准要求了食品中霉菌和酵母菌（mouldsandyeasts）计数方法。本标准适适用于各类食品中霉菌和酵母菌计数。3责任质量部组织制订、化验室负责实施。4内容4.1设备和材料除微生物试验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料以下：4.1.1冰箱：2℃～5℃。4.1.2恒温培养箱：28℃±1℃。4.1.3均质器。4.1.4恒温振荡器。4.1.5显微镜：10×～100×。4.1.6电子天平：感量0.1g。4.1.7无菌锥形瓶:容量500mL、250mL。4.1.8无菌广口瓶：500mL。4.1.9无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。4.1.10无菌平皿：直径90mm。4.1.11无菌试管:10mm×75mm。4.1.12无菌牛皮纸袋、塑料袋。4.2培养基和试剂4.2.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录A中A.1。4.2.2孟加拉红培养基：见附录A中A.2。4.3检验程序霉菌和酵母计数检验程序见图1。图1霉菌和酵母计数检验程序4.4操作步骤4.4.1样品稀释4.4.1.1固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水锥形瓶中，充足振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225mL无菌蒸馏水均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10样品匀液。4.4.1.2液体样品：以无菌吸管吸收25mL样品至盛有225mL无菌蒸馏水锥形瓶（可在瓶内预置合适数量无菌玻璃珠）中，充足混匀，制成1:10样品匀液。4.4.1.3取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。4.4.1.4按5.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管。4.4.1.5依据对样品污染情况估量，选择2个～3个适宜稀释度样品匀液（液体样品可包含原液），在进行10倍递增稀释同时，每个稀释度分别吸收1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。4.4.1.6立即将15mL～20mL冷却至46℃马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。4.4.2培养待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养5d，观察并统计。4.4.3菌落计数肉眼观察，必需时可用放大镜，统计各稀释倍数和对应霉菌和酵母数。以菌落形成单位（colonyformingunits，CFU）表示。选择菌落数在10CFU～150CFU平板，依据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板可统计为多不可计。菌落数应采取两个平板平均数。4.5结果和汇报4.5.1计算两个平板菌落数平均值，再将平均值乘以对应稀释倍数计算。4.5.1.2若全部平板上菌落数均大于150CFU，则对稀释度最高平板进行计数，其它平板可统计为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。4.5.1.3若全部平板上菌落数均小于10CFU，则应按稀释度最低平均菌落数乘以稀释倍数计算。4.5.1.4若全部稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。4.5.2汇报4.5.2.1菌落数在100以内时，按“四舍五入”标准修约，采取两位有效数字汇报。4.5.2.2菌落数大于或等于100时，前3位数字采取“四舍五入”标准修约后，取前2位数字，后面用0替换位数来表示结果；也可用10指数形式来表示，此时也按“四舍五入”标准修约，采取两位有效数字。4.5.2.3称重取样以CFU/g为单位汇报，体积取样以CFU/mL为单位汇报，汇报或分别汇报霉菌和/或酵母数。附录A(规范性附录)培养基和试剂A.1马铃薯-葡萄糖-琼脂A.1.1成份马铃薯(去皮切块)300g葡萄糖20.0g琼脂20.0g氯霉素0.1g蒸馏水1000mLA.1.2制法将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10min～20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，121℃灭菌20min。倾注平板前，用少许乙醇溶解氯霉素加入培养基中A.2孟加拉红培养基A.2.1成份蛋白胨5.0g葡萄糖10.0g磷酸二氢钾1.0g硫酸镁（无水）0.5g琼脂20.0g孟加拉红0.033g氯霉素0.1g蒸馏水1000mLA.2.2制法上述各成份加入蒸馏水中，加热溶化，补足蒸馏水至1000mL，分装后，121℃灭菌20min。倾注平板前，用少许乙醇溶解氯霉素加入培养基中。附录B(资料性附录)霉菌直接镜检计数法常见为郝氏霉菌计测法，本方法适适用于番茄酱罐头。