粪便乳杆菌FZB1的分离鉴定与益生特性研究.doc

粪便乳杆菌FZB1的分离鉴定与益生特性研究目的分离鉴定粪便乳杆菌FZB1菌株,并研究其益生特性。材料与方法1.分离鉴定菌株利用16SrDNA、rpoA和recA保守基因克隆测序和序列分析,并使用细菌微量生化管和常规生化实验测定糖发酵产酸等生化特征。2.探究粪便乳杆菌FZB1菌株耐酸、耐胆盐、碳源底物的利用能力和温度生长情况及粪便乳杆菌FZB1菌株对肠上皮细胞HT-29黏附性能和对病原菌大肠杆菌E57黏附抑制影响。3.我们利用聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)技术来追踪喂饲和不喂饲粪便乳杆菌FZB1的Balb/cJ小鼠粪便样品,研究粪便乳杆菌FZB1菌株在Balb/cJ小鼠肠道内的黏附定植情况。4.开展粪便乳杆菌FZB1菌株对宿主焦虑症状影响的相关研究。使用RU24969药物诱导Balb/cJ小鼠的焦虑症状出现,然后运用不同行为学实验仪器:Morris圆形水迷宫、高架十字迷宫和社交行为实验对其进行行为学评估。结果1.分离鉴定实验发现,粪便乳杆菌FZB1的16SrDNA基因和粪便乳杆菌AFL13-2的16SrDNA基因最相似,相似性为99.2%。rpoA的氨基酸残基序列比对结果表明:该菌株和姬鼠乳杆菌、动物乳杆菌、鼠乳杆菌的亲缘关系最近,其相似性分别达到了97.1%、97.1%和96.7%。该菌株的recA氨基酸残基序列和粪便乳杆菌完全相同,和姬鼠乳杆菌、动物乳杆菌、鼠乳杆菌recA氨基酸残基序列有较高的相似性,分别为91.9%、91.5%和91.5%。生化鉴定结果表明:该菌株符合乳杆菌属和粪便乳杆菌的生化特征,被鉴定为:粪便乳杆菌FZB1(=CGMCC10515)。2.在碳源利用和耐酸、耐胆盐实验中发现,该菌株可利用乳糖、可耐受pH3的酸度,可在0.4%的牛磺石胆酸钠、0.08%的胆酸钠、0.15%的禽胆盐、0.15%的脱氧胆酸钠、0.15%的牛磺鹅脱氧胆酸钠和0.06%的牛胆盐环境中生长。温度生长实验结果表明,该菌在37℃条件下生长更好。3.粪便乳杆菌FZB1菌株对肠上皮细胞HT-29具有很强的黏附能力,黏附率可达88.7%,比对照组福菜乳杆菌标准株YM0097高11.8%,阻止大肠杆菌E57的黏附主要通过置换作用,相对置换率达9.9%,竞争或排斥作用总体上能促进大肠杆菌E57对肠上皮细胞的黏附作用。4.粪便乳杆菌FZB1菌株可在Balb/cJ小鼠肠道中黏附定植,黏附定植时间为13天。使用RU24969药物诱导Balb/cJ小鼠的焦虑症状出现,然后运用不同行为学实验仪器:Morris圆形水迷宫、高架十字迷宫和社交行为实验对其进行行为学评估。实验结果证明,粪便乳杆菌FZB1菌株可缓解Balb/cJ小鼠焦虑症状。结论通过以上研究,我们发现自白鹭粪便中分离得到的乳杆菌,确定为粪便乳杆菌。这株粪便乳杆菌能够降解乳糖、耐酸、耐不同来源不同浓度胆盐、对肠上皮细胞HT-29具有很强的黏附能力及能黏附定植于Balb/cJ小鼠肠道,黏附定植时间为13天,并能缓解Balb/cJ小鼠焦虑症状,粪便乳杆菌FZB1菌株可进一步开发为新型益生菌制剂。