粗茎鳞毛蕨绵马贯众素ABBA的提取及其抗肿瘤活性的研究.doc

粗茎鳞毛蕨绵马贯众素ABBA的提取及其抗肿瘤活性的研究粗茎鳞毛蕨(Dryopteriscrassirhizoma)为鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物,其干燥根茎称作绵马贯众。其有驱虫、抗疟疾,抗病毒,抗肿瘤作用。绵马贯众具有黄酮、萜类、间苯三酚等有效成分,其中间苯三酚类物质为最主要的有效成分。绵马贯众素ABBA是从绵马贯众提取分离得到的间苯三酚类物质,报道具有抗肿瘤作用,其机制未曾报道。本文以野生粗茎鳞毛蕨干燥根茎为材料,提取分离了绵马贯众中总间苯三酚类化合物,初步确定有效成分及敏感肿癌细胞株,对抗肿瘤活性及分子机制研究发现绵马贯众素ABBA对HepG2细胞具有促凋亡作用,抗肿瘤机制是通过内源性的线粒体途径诱导的。以下为本文研究的初步结果:(1)取粗茎鳞毛蕨根状茎阴干后用粉碎机粉碎,过40目筛网。取500g粗茎鳞毛蕨根状茎粉末,80%乙醇为提取剂浸泡,料液比1:10,进行超声辅助提取30min,重复三次。收集离心后的上清液,分液漏斗过滤,去除残渣。然后用正己烷萃取,保留上层正己烷相,旋转蒸发浓缩成浸膏,得出粗总间苯三酚化合物。(2)利用DM-130大孔吸附树脂对粗茎鳞毛蕨总间苯三酚的分离纯化条件进行了研究。以总间苯三酚吸附率、洗脱率以及总间苯三酚纯度为考察指标,考查DM-130大孔吸附树脂对总间苯三酚的吸附洗脱能力。确定最佳上样条件为:粗茎鳞毛蕨上样液中总间苯三酚的浓度为1.5mg/mL,最大上样体积为7BV(210mL)。用浓度为80%乙醇进行洗脱目标化合物,流速在1.0mL/min时洗脱结果最好。DM-130大孔吸附树脂对粗茎鳞毛蕨总间苯三酚有良好的吸附和解吸性能,纯化后与之前没有经过处理的样品相比总间苯三酚浓度有14.17倍增加。(3)通过高效液相色谱法得出纯化后绵马贯众素ABBA浓度极高,通过峰面积推测其含量在总成分的60%以上。通过液相色谱将化合物中不同成分分离后对肿瘤细胞作用发现提取物中起到抗肿瘤作用的物质为绵马贯众素ABBA。同时也得出人类肝癌HepG2细胞对绵马贯众素ABBA最敏感。(4)药物处理后通过MTT比色法检测其细胞的活率,AnnexinV-PI双染法检测早晚期的细胞凋亡,分子水平上对相关凋亡因子表达量检测发现绵马贯众素ABBA对HepG2细胞具有浓度依赖性的促凋亡作用。绵马贯众素ABBA通过激活内源性的线粒体途径,调控凋亡相关因子的表达,最终促进HepG2细胞凋亡。以上结果对绵马贯众素ABBA临床研究提供了初步的理论基础。