淫羊藿次苷Ⅱ抗脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应研究.doc

淫羊藿次苷Ⅱ抗脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应研究目的:研究ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响,并探索其可能的作用机制。方法:体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组(20μMICSⅡ)、模型组(1μg/mLLPS)、模型+ICSⅡ低浓度组(1μg/mLLPS+5μMICSⅡ)、模型+ICSⅡ中浓度组(1μg/mLLPS+10μMICSⅡ)、模型+ICSⅡ高浓度组(1μg/mLLPS+20μMICSⅡ)、模型+地塞米松组(1μg/mLLPS+1μMDXMS)。ICSⅡ(5,10,20μM)或DXMS(1μM)预处理星形胶质细胞1h后,继续与脂多糖共同作用24h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α、IL-1β、Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Griess法检测星形胶质细胞中NO的水平;采用蛋白免疫印迹技术检测COX-2、iNOS、I1κB-α、NF-κB(p65)(胞核)、NF-κB(p65)(胞质)、BACE1和APP的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合情况。结果:ICSⅡ(0-50μM)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细μ胞中TNF-α、IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症相关蛋白COX-2、iNOS、NF-κB(p65)(胞核)、BACE1及淀粉样前体蛋白APP表达升高(P<0.05);IκB-α、NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α、IL-1β和NO水平(P<0.05),此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2、iNOS、NF-κB(胞核)、BACE1及淀粉样前体蛋白APP的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05);同时,显著降低NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论:在本实验条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB/BACE1信号通路对LPS诱导的星形胶质细胞炎症发挥保护作用。