尼古丁对Ca-(2+)CaN-NFATc信号通路在哮喘发病机制中作用的影响.doc

尼古丁对Ca~（2+）/CaN-NFATc信号通路在哮喘发病机制中作用的影响第一部分Ca2+/CaN-NFATc信号通路在哮喘发病机制中作用的研究第一节钙调神经磷酸酶在哮喘大鼠气道重塑中的作用目的：通过测定哮喘大鼠肺组织中钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)蛋白、mRNA的表达及CaN活性,探讨CaN在哮喘大鼠气道重塑中的作用。方法：将20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只。用10%卵白蛋白(ovalbumin，OVA)溶液致敏,2%OVA溶液雾化吸入激发,建立哮喘模型。HE染色观察气道炎症情况；图像分析观察支气管管壁厚度；实时定量(Real-time)PCR测定肺组织中CaNmRNA水平；免疫组织化学法检测肺组织中CaN蛋白的表达；生物化学法检测大鼠肺组织CaN活性；流式细胞仪测定外周血单个核细胞细胞周期时相分布；ELISA法(酶联免疫吸附试验)测定血浆中IL-4、TNF-α的含量。结果：1.哮喘组大鼠支气管管壁厚度[(20.1190±2.4045)μm2／μm]较对照组[(13.0476±1.4327)μm2／μm]明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。2.哮喘组大鼠肺组织中CaNmRNA水平的相对表达(1.21-2.71)、CaN蛋白的相对表达量(0.3725±0.0586)及CaN的活性[(0.0588±0.0150)μmolPi/(mgprot·hour-1)]均较对照组[分别为(0.84-1.19)、(0.2407±0.0450)和(0.0379±0.0120)μmolPi/(mgprot·hour-1)]高,差异有统计学意义(分别P<0.05,P<0.01和P<0.01)。3.哮喘组大鼠血浆中IL-4、TNF-α的含量[分别为(327.5443±39.8024)pg／ml和(228.0855±60.1975)pg/ml]较对照组[分别为(223.3017±40.9510)pg/ml和(174.1766±33.0778)pg/ml]增加,差异有统计学意义(分别P<0.01和P<0.05)。4.哮喘组外周血单个核细胞G0／G1期百分率(90.0980±2.3468)%较对照组(95.1840±2.6970)%降低,S期、S+G2／M期百分率[分别为(7.3950±1.9028)%和(9.9020±2.3468)%]均较对照组[分别为(4.8160±2.6970)%和(3.2440±2.1460)%]增加,差异均有统计学意义(P均<0.01)。5.(1)大鼠肺组织CaN活性与大鼠支气管管壁厚度呈正相关(P<0.01),与处于S期、S+G2／M期的外周血单个核细胞百分率呈正相关(P均<0.05),与血浆中IL-4的含量亦呈正相关(P<0.05)；(2)血浆中IL-4含量与TNF-α含量及大鼠支气管管壁厚度亦呈正相关(P均<0.05)。结论：哮喘大鼠肺组织CaN的活性增加,其可能通过促进气道管壁增厚、外周血单个核细胞的增殖、活化及L-4和TNF-α的产生而参与哮喘气道重塑的形成。第二节哮喘大鼠肺组织Ca2+/CaN-NFATc活性及其与Th1／Th2失衡的关系目的：探究哮喘大鼠肺组织Ca2+/CaN-NFATc的活性及其与Th1／Th2失衡的关系。方法：20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只。用10%OVA溶液致敏和2%OVA溶液雾化吸入激发,建立大鼠哮喘模型。HE染色观察气道炎症,图像分析测量气道管壁厚度；生物化学法检测肺组织钙含量、CaN活性；Westernblotting法测定肺组织去磷酸化NFATc蛋白的表达及ELISA法测定IL-4、IL-2的含量。结果：1.哮喘组大鼠支气管管壁厚度[(20.1190±3.0795)μm2／μm]较对照组[(13.0476+2.0616)μm2/μm]支气管管壁厚度明显增加(P<0.01)。2.哮喘组大鼠肺组织中IL-4含量[(4.7309±0.2356)pg/ml]、IL-4／IL-2比值(1.1255±0.1092)分别较对照组[(3.4635±0.4468)pg/ml和(0.6649±0.0875)]增高,而哮喘组IL-2含量[(4.2251±0.2751)pg/ml]较对照组[(5.2161±03093)pg/ml]降低,差异有统计学意义(P均<0.01)。3.哮喘组CaN活性[(0.0560±0.0202)μmolPi/(mgprot·hour-1)]和去磷酸化NFATc蛋白的相对表达量(1.0685±0.0497)均较对照组[分别为(0.0362±0.0121)μmolPi/(mgprot·hour-1)和(0.6260±0.0377)]