中华鳖养殖水质调控及嗜水气单胞菌缓释疫苗研制.doc

中华鳖养殖水质调控及嗜水气单胞菌缓释疫苗研制温室集约化养殖是我国中华鳖养殖业中最重要的一种养殖方式。随着中华鳖养殖业的迅速发展，这种养殖模式的弊端凸现：养殖水体恶化严重，有益的菌群和必需的浮游动植物受到抑制，中华鳖品质下降，水中气单胞菌属的多种致病菌加速繁殖，成为优势菌群。而在现阶段多采用大排大注的方式解决水质下降问题，既导致了水资源的浪费，又污染了周围环境；在中华鳖多种病症的病灶部位均可以分离得到嗜水气单胞菌，这也说明了气单胞菌属的嗜水气单胞菌Aeromonashydrophila是中华鳖多种疾病的病原菌。因此，保证中华鳖的优质生长环境以及抑制可以导致多种疾病爆发的嗜水气单胞菌变得尤为重要。本实验在中华鳖养殖中采用了3种节水型渔业养殖新技术，研究其对水质是否有改良作用，并通过研制嗜水气单胞菌口服缓释疫苗，试图从免疫防治角度解决中华鳖嗜水气单胞菌病问题。1实验中采用3种节水型渔业养殖技术：使用微生态制剂（全池泼洒益水素，饲料中添加纳豆命）；浮床栽培空心菜；套养清道夫鱼，研究上述3种方式对养殖水质的影响。结果显示：1）微生态制剂试验：全池泼洒益水素与饲料添加纳豆命的实验组的水体细菌总数由最初8.5×10~4cfu/mL降低至7.1×10~4cfu/mL，嗜水气单胞菌数量由2.3×10~4cfu/mL降低至8×10~3cfu/mL，芽孢杆菌数量由4×10~3cfu/mL上升至1×10~4cfu/mL；2）空心菜试验：15%水面浮床栽培空心菜实验组到实验中期的数据显示总氮增长率为30.2%、总磷增长率为6.8%、COD增长率为45.6%，硝酸氮增长率为41.7%、亚硝酸氮增长率为0%、叶绿素去除率为8.3%，与此同时对照组总氮增长率为66.1%、总磷增长率为1.6%、COD增长率为66.9%，硝酸氮增长率为118.8%、亚硝酸氮增长率为84.6%、叶绿素增长率为14.3%；3）清道夫试验：套养清道夫鱼实验组到实验中期的采样数据显示总氮增长率为49.7%、总磷增长率为4.3%、COD增长率为34.2%，硝酸氮增长率为88.3%、亚硝酸氮增长率为63.6%、叶绿素去除率为2.4%，而对照组总氮增长率为63.4%、总磷增长率为4.1%、COD增长率为60.5%，硝酸氮增长率为95.0%、亚硝酸氮增长率为133.3%、叶绿素增长率为16.7%。实验证明，在改善水质过程中，采用微生态制剂可以改善水体中的微生态，芽孢杆菌的数量增加可以明显减少水体中竞争菌种的数量，并导致嗜水气单胞菌数显著下降。浮床栽培空心菜以及套养清道夫鱼对水化学指标有较好的控制作用。2利用氨苄青霉素麦康凯琼脂基础培养基从养殖水体中分离得到嗜水气单胞菌，福尔马林灭活，包裹于聚（乳酸-羟基乙酸）共聚物(PLGA)中，制成缓释微球，口服免疫中华鳖。结果显示：通过对此菌进行生理生化特性分析，菌落形态和菌体特征证实了分离的细菌为嗜水气单胞菌。缓释微球疫苗体外释放可持续近40d；中华鳖的免疫应答结果显示：血清抗体效价可达1:512、白细胞吞噬率可达71.25%、白细胞吞噬指数可达1.51、淋巴细胞转化率可达77.25%，实验前30d与注射灭活菌液疫苗没有显著性差异（P＞0.05），到第40d，又显著高于注射灭活菌液疫苗；在攻毒实验中，注射免疫组和微球疫苗免疫组的免疫保护率均为85%，对照组中华鳖在攻毒后全部死亡。实验证明，中华鳖口服嗜水气单胞菌微球缓释疫苗可以达到注射灭活菌液疫苗的水平，且持续性要优于注射免疫，说明缓释微球疫苗具有良好的持续性和有效性。