中华苦荬菜总黄酮提取物的制备和治疗2型糖尿病的药效及机制研究.doc

中华苦荬菜总黄酮提取物的制备和治疗2型糖尿病的药效及机制研究目的：确立中华苦荬菜总黄酮提取物最佳制备工艺；建立中华苦荬菜总黄酮提取物的质量标准,并研究其治疗2型糖尿病模型(T2DM)大鼠的药效作用及机制。方法：采用单因素实验和正交设计,确定中华苦荬菜总黄酮提取物的最佳提取及纯化工艺；对所得提取物通过TLC定性鉴别,HPLC,UV等方法定量检测,并按照药典相关办法对水分、灰度等项目进行检查,建立特征图谱,最终建立质量控制标准；对SD雄性大鼠以高脂高糖饲料喂养联合链尿佐菌素(STZ)腹腔注射进行造模,以Omin和120min血糖分别大于7.0mmol·L-1(?)11.0mmol·L-1作为成模标准。成模大鼠灌胃给药中华苦荬菜总黄酮提取物以及消渴丸和二甲双胍,5周后测定体重、尿量等体征,然后腹主动脉取血,检测血糖、胰岛素、糖化血红蛋白、血脂等指标,并取骨骼肌、肝脏、肾脏,PCR测定TGF-β、GLUT-4mRNA表达,WesternBlot检测PPAR-α及PPAR-γ蛋白表达量以研究其药效机制。结果：确定中华苦荬菜总黄酮提取物的最佳制备工艺,即以40%乙醇回流提取,提取时间为3小时,提取次数3次,料液比为1：8,以HPD100型大孔吸附树脂纯化；建立了中华苦荬菜总黄酮提取物的质量标准,暂定总黄酮含量不得少于255.98mg·g-’,木犀草苷含量不得少于58.09mg·g-’,以木犀草苷为参照峰,确定中华苦荬菜总黄酮提取物特征图谱的9个共有峰作为图谱的特征组分；T2DM造模成功大鼠经给药5周后,苦荬菜高剂量组与模型组相比能明显降低空腹血糖、口服糖耐量30min血糖水平以及空腹胰岛素水平(P<0.05),降低糖化血红蛋白,改善胰岛素抵抗(P<0.01),使GLUT-4mRNA表达量明显升高,TGF-βmRNA表达量明显降低,PPAR-α及PPAR-γ蛋白表达量明显升高(P<0.01)结论：所建质量控制方法准确、科学、简便；中华苦荬菜总黄酮提取物制备工艺条件合理可行;提取物对T2DM大鼠有较好的治疗作用,能够显著降低血糖,调节胰岛素水平及糖化血红蛋白水平,同时减轻“三多一少”症状,还能从一定程度上预防糖尿病肾病的发生；其机制可能为通过上调PPAR-α和PPAR-γ蛋白水平,进而上调外周组织GLUT-4mRNA和下调TGF-βmRNA表达量,从而降低炎症反应并促进外周组织对葡萄糖的利用,调节脂质代谢水平,降低血脂的同时升高HLD-C,最终增加胰岛素敏感性。本研究为进一步开展中华苦荬菜制剂研究及临床研究奠定良好的基础。