东方梨扩繁体系的优化和叶片高效再生体系的建立.doc

东方梨扩繁体系的优化和叶片高效再生体系的建立我国是世界梨属(PyrusL.)植物最主要的起源地之一,梨种类和栽培面积均居世界首位[1]。以植物组织培养、离体组织再生为主体的遗传转化技术在梨上的应用,极大的推动了梨的种质创新和品种选育进程,成为梨基因工程育种的一个有效途径。但相对于其他物种来说,梨的遗传转化研究进展缓慢,遗传转化效率很低。其主要原因在于(1)木本植物组培苗生长缓慢,材料生长周期长,生长过程中易发生污染。(2)梨品种再生困难,再生率低、不同品种之间再生率相差很大[2],尤其是经过侵染,共培养、暗培养等一系列操作后,其再生出不定芽的机率更低。组培苗扩繁体系和叶片再生体系作为遗传转化体系建立的前提和基础,获得优质、快速的组培苗扩繁体系和高效的叶片再生体系显得极为重要。本试验以’鸭梨’、’翠冠梨’、’京白梨’、’雪花梨’为材料,研究不同6-BA和IBA配比对梨扩繁体系的影响。以期优化梨继代培养技术体系,探索出最佳的继代培养基使得梨组培苗获得较短的继代周期和较高的芽增殖率;并以‘京白梨’和‘雪花梨,叶片为材料对影响梨叶片再生的因素进行探索,以期建立梨组培苗的高效再生体系,获得高的不定芽再生率,为梨快繁、脱毒和遗传转化研究提供理论依据和参考。主要研究结果如下:1.‘鸭梨,的最佳继代培养基为:MS+0.4mg·L-1IBA+1.5mg·L-16-BA+30g·L-1蔗糖+6.5g·L-1琼脂,其芽平均增殖率为4.33,植株高度为2.27cm;‘翠冠梨’的最佳继代培养基为:MS+0.3mg·L-1IBA+1.0mg·L-16-BA+30g·L-1蔗糖+6.5g.L-1琼脂,其芽平均增殖率为5.67,植株高度为2.3cm;’京白梨’的最佳培养基为:MS+0.3mg·L-1IBA+1.5mg·L-16-BA+30g·L-1蔗糖+6.5g.L-1琼脂,其芽平均增殖率为6.33,植株高度为1.8cm;’雪花梨,的最佳继代培养基为:MS+0.3mg·L-1IBA+1.0mg·L-16-BA+30g·L-1蔗糖+6.5g.L-1琼脂,其芽平均增殖率为5.33,植株高度为2.73cm。2.适宜‘雪花梨’叶片再生的培养基为NN69+1.5mg·L-1TDZ+0.2mg·L-1IBA,再生率达到70.83%,平均每叶再生芽数为2.06个,愈伤发生率达到100%,褐化率为0;远轴面朝下接种有利于提高叶片再生率;能使芽再生率最高的暗培养时间为21d;缩短暗培养时间和提高细胞分裂素与生长素含量能有效防止褐化;适宜再生芽初代培养的培养基为MS+0.2mg·L-1IBA+1mg·L-16-BA。适宜’京白梨’叶片再生的培养基为NN69+1.0mg·L-1TDZ+0.5mg·L-1IBA,再生率达到66%,平均每叶再生芽数为2.10个,愈伤发生率达到100%,褐化率为28%;远轴面朝下接种有利于提高叶片再生率;能使芽再生率最高的暗培养时间为21d;缩短暗培养时间和提高细胞分裂素与生长素含量能有效防止褐化;适宜再生芽初代培养的培养基为MS+0.2mg.L-1IBA+1mg·L-16-BA。