丙泊酚对大鼠肝脏细胞色素酶P450及同工酶影响的研究.doc

丙泊酚对大鼠肝脏细胞色素酶P450及同工酶影响的研究随着对药物代谢酶的研究不断深入,药物在体内代谢的研究不在局限于对代谢产物的分离鉴定,而是参与药物代谢的酶学特征及相关基因分子生物学特征。细胞色素P450(cytochromeP450,CYP)是参与众多外源物和内源物在体内代谢失活/活化的重要酶系,主要存在于肝微粒体中。CYP催化外源物的代谢具有范围广、专一性差、结构差别大、个体差异大、催化底物有交叉重叠性以及易受诱导和抑制等特点。在药物代谢过程中往往存在一种CYP亚族参与多个药物代谢、一种药物由多个CYP亚族催化代谢的现象。同时,许多药物既是某种药酶的底物,也可能是该种酶或其他酶的诱导剂或抑制剂,当多种药物联合用药时,有可能导致其中一种药物发生代谢障碍或加快代谢速度,使发生毒副反应或药物效应降低。丙泊酚由于生物转化迅速而成为临床上应用最广泛的麻醉药。经典的观点认为丙泊酚不需经过P450氧化代谢,在肝内主要由葡萄糖醛酸降解为醌类代谢产物而排除。但现在观点认为CYP3A4、CYP2C9、CYP2A6等多种P450同工酶均能代谢丙泊酚,其中62%丙泊酚通过葡萄糖醛酸代谢,38%由P450同工酶代谢。而细胞色素酶P450的活性受药物、环境因子,甚至食物成分以及炎症等多种因素的影响而发生改变。但是有关丙泊酚对细胞色素酶P450同工酶影响的研究未见报道。本研究通过以经典的酶诱导剂75mg/kg苯巴比妥钠作为对照组,通过腹腔给药测定丙泊酚对SD大鼠肝细胞色素酶P450及CYP2E1、CYP3A4的影响。1.丙泊酚和苯巴比妥钠麻醉ED50的测定:目的:序贯法测定SD大鼠腹腔注射苯巴比妥钠和丙泊酚的麻醉半数有效量ED50,确定丙泊酚的酶诱导剂量。方法:36只SD大鼠,随机分为两组:苯巴比妥钠组(n=18),丙泊酚组(n=18)。大鼠腹腔给药后立即观察大鼠的行为学表现,以大鼠前爪翻正发射消失作为麻醉终点的指标,前爪翻正反射恢复作为意识恢复的指标。用序贯增减法确定给药剂量,根据公式ED50=lg-1(ΣC/Σt)计算各组动物的ED50,在此基础上求出两药ED50的效价比。结果:序贯法测定SD大鼠苯巴比妥钠的半数有效量ED50为122.415mg/kg;丙泊酚的麻醉半数有效量ED50为59.452mg/kg,两种药物ED50的效价比为0.486。结论:75mg/kg苯巴比妥钠麻醉镇静剂量相当于丙泊酚36.42mg/kg。2.从行为学上观察丙泊酚对细胞色素酶P450的影响目的:从行为学上观察丙泊酚对细胞色素酶P450的影响。方法:健康雄性大鼠分为:苯巴比妥钠组75mg/kg、丙泊酚组36.42mg/kg、对照组等体积的生理盐水,每组8只,每天单次腹腔注射,连续用药三天后,在给予1.5倍ED50丙泊酚75mg/kg,测定大鼠的反正翻射消失和恢复时间.观察其行为学表现.(翻正反射消失的时间和恢复时间)。结果:SD大鼠苯巴比妥钠、丙泊酚和生理盐水组分别每天单次腹腔注射,连续三天,第四天测定大鼠丙泊酚麻醉的翻正反射,与生理盐水组比较,丙泊酚组潜伏期缩短P<0.01。结论:丙泊酚具有与苯巴比妥钠相同的酶诱导现象。3.研究丙泊酚对肝微粒体蛋白和细胞色素酶P450及其同工酶含量的变化目的:测定丙泊酚对肝微粒体蛋白和细胞色素酶P450及其同工酶含量的变化。方法:健康雄性SD大鼠36只,体重180-220g,随机分为3组,苯巴比妥钠组、丙泊酚组、生理盐水组,分别给予大鼠苯巴比妥钠75mg/kg、丙泊酚36.42mg/kg及等量生理盐水,持续三天。钙沉淀法制备大鼠肝微粒体溶液,并测定肝微粒体蛋白含量和P450的含量以及同工酶CYP2E1、CYP3A4的活性。结果:三组间肝重指数无统计学意义(p>0.05),三组间肝微粒体蛋白含量经单因素方差分析差异有统计学意义(p<0.05),与生理盐水组比较(p<0.05),苯巴比妥钠组和丙泊酚组微粒体蛋白含量升高(p<0.05)。大鼠肝微粒体CYP450含量,与生理盐水组比较,苯巴比妥钠组和丙泊酚组P450含量增高(p<0.05),与苯巴比妥钠组比较,苯巴比妥钠组CYP450含量增加更加显著(p<0.05);各组间氨基比林-N脱甲基酶活性、红霉素脱甲基酶活性单因素方差分析差异有统计学意义,与生理盐水组比较,苯巴比妥钠组氨基比林-N脱甲基酶活性显著增高(p<0.01),而丙泊酚组酶活性差异无统计学意义,提示丙泊酚对大鼠氨基比林-N-脱甲基活性无影响,红霉素脱甲基酶活性结果分析表明,与生理盐水组比较,苯巴比妥钠组红霉素脱甲基酶活性显著上升(p<0.01);而丙泊酚组红霉素脱甲基酶活性明显降低(p<0.01)。结论:丙泊酚对大鼠肝微粒体蛋白、细胞色素P450酶具有诱导作用,对CY