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本发明特别涉及一种基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法,包括如下步骤:(A)取正常尿液和待检测尿液,去除尿液中的尿素;(B)向去除尿素后的正常尿液中加入肌酐粉末,制作标准浓度肌酐样本;(C)SERS基底合成;(D)采集肌酐样本和去除尿液的待检测尿液在SERS基底上反应后的SERS光谱,对光谱数据进行处理得到待检测尿液中的肌酐浓度。通过去除尿液中尿素,可避免尿素的?NH2基团对SERS的增强基底金/银颗粒的强吸附而阻碍尿液中肌酐分子的吸附,进而消除了尿液的SERS检测中存在大量尿素造成的竞争效应,提高了尿液中肌酐的拉曼响应,检测灵敏度高。