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本发明公开了一种DNA聚合酶封闭试剂及方法,属于分子生物学技术领域。本发明的封闭试剂由40?50个核苷酸组成,中间有一段8?10个核苷酸组成的回文序列,序列GC含量为50?70%。封闭方法包括以下步骤:将100?150nM封闭试剂先95℃处理5?10分钟,然后缓慢降至室温,然后与1?2U/μLDNA聚合酶等体积混合,室温孵育30分钟?1小时。本发明成本较低、DNA聚合酶的封闭效果好,能明显降低PCR的非特异扩增;PCR过程中经95℃高温处理后,DNA聚合酶活性可以充分释放,保证后续PCR扩增的效率。