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本发明涉及马铃薯培育领域,公开了一种利用地下水恒温培养马铃薯组培苗的方法,包括如下步骤:1)将培养基配制好后分装到组培瓶中,经121~123℃的高温灭菌18?20分钟后,放置3?5天;2)在超净工作台上将马铃薯组培苗剪切成段,插入到组培瓶中的培养基上;3)将组培瓶放置到组培瓶水槽中,将恒温地下水注入到组培瓶水槽中,利用恒温地下水较大的热容在超过适宜温度时为组培苗降温,低于适宜温度时为组培苗增加温度;4)白天完全使用自然光,在组培苗生长至一定的阶段再进行田间移栽栽培。本发明的目的在于利用自然光热资源及恒温地下水能源,降低生产成本,提高组培苗产品的质量,解决了现有组培苗大规模生产能耗高、苗不壮不整齐的问题。