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本发明涉及一种红色荧光碳点及其制备方法和应用,属于荧光纳米材料技术领域。本发明的红色荧光碳点的制备方法,包括以下步骤:将3,4?二氨基苯磺酸、尿素和HCl在水中于密闭条件下进行水热反应,然后对水热反应后的体系进行色谱分离,得到红色荧光碳点;所述3,4?二氨基苯磺酸、尿素和HCl的质量比为(3~10):(1~3):(0.05~0.06)。本发明的红色荧光碳点的制备方法制备的红色荧光碳点具有荧光发射峰与激发光波长不依赖的特性,可以应用于溶酶体特异性成像。