siRNA沉默hTERT基因对人胰腺癌的凋亡和耐药基因的影响的开题报告.docx

siRNA沉默hTERT基因对人胰腺癌的凋亡和耐药基因的影响的开题报告一、研究背景和意义：人类端粒酶逆转录酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTERT）是肿瘤细胞唯一能够维持端粒长度的酶，同时也是多种肿瘤中的关键调控分子。hTERT在肿瘤细胞中的表达明显增强，在分化程度低、侵袭性强的肿瘤中表达较高，同时与肿瘤的侵袭及预后有关。因此，抑制hTERT基因的表达，以期达到抑制肿瘤细胞生长的目的，成为当前肿瘤治疗领域的研究热点之一。RNA干扰技术（RNAinterference，RNAi）是一种基于siRNA（smallinterferingRNA）介导的转录后沉默技术。siRNA能够特异地沉默靶基因的表达，从而抑制靶基因的功能，现已被广泛用于各类肿瘤生物学研究和临床治疗中。本研究旨在通过RNA干扰技术，探讨siRNA沉默hTERT基因对人胰腺癌的凋亡和耐药基因的影响，为临床治疗提供参考。二、研究内容和方法：1.搭建RNA干扰模型：利用化学合成技术合成siRNA，设计靶向hTERT基因的siRNA序列。将siRNA转染入人胰腺癌细胞株中，以RNA干扰技术沉默hTERT基因。2.检测siRNA沉默hTERT基因的效果：采用Westernblot技术检测细胞中hTERT的蛋白表达水平，RT-qPCR技术检测hTERT的mRNA表达水平，以及TRAP-PCR技术检测端粒酶活性水平。3.观察siRNA沉默hTERT基因对胰腺癌细胞的凋亡和耐药基因的影响：采用MTT法检测细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，DNA电泳技术检测凋亡相关蛋白如Bax和Bcl-2的表达水平，以及Westernblot技术检测碱基切除修复（BER）和核苷酸交换修复（NER）两种DNA修复酶的表达水平。三、研究预期结果：本研究预期结果为siRNA沉默hTERT基因能够抑制胰腺癌细胞的增殖能力，促进细胞凋亡，并影响细胞DNA的修复能力，降低肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。四、研究意义和社会价值：本研究有望为肿瘤生物学的理论研究和临床治疗提供更为丰富的理论依据和实验数据，推动肿瘤治疗领域的进一步发展，为提高肿瘤治疗的有效性和降低其副作用，以及提高患者生活质量做出积极的贡献。