磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法.doc

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法HYPERLINK"http://ionegun.blog.163.com/blog/"\l"m=0&t=1&c=fks_087069082094084068085085080095085084086074085085082069093"科研实验2010-04-2022:25:48阅读935评论0字号：大中小订阅0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L称7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L。保存于4℃冰箱中即可。需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。母液的配制：0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各种另PH值的0.2MPB（100ml)配方：pH0.2MNaH2PO4（ml）0.2MNa2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO42.22.22.22.2NaH2PO40.10.20.30.4根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PBS缓冲液称取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO4?12H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。PBST缓冲液取300μlTween-20加入PBS100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~PH8.0的PBS配方详细1.NaCl137mmol/L，KCl2.7mmo