一种从水培拟南芥中提取花青素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107459504A(43)申请公布日2017.12.12(21)申请号201710585941.X(22)申请日2017.07.18(71)申请人中国科学院南京土壤研究所地址211300江苏省南京市高淳区古檀大道1号开发区管委会(72)发明人沈仁芳赵旭升朱晓芳吴启(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人唐循文(51)Int.Cl.C07D311/62(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种从水培拟南芥中提取花青素的方法(57)摘要一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于该方法以拟南芥为提取材料，通过施加养分胁迫提高茎叶中的花青素含量，茎叶样品经液氮破碎，并用稀硫酸溶液提取，再通过阴离子交换树脂从而浓缩在甲醇中。本发明通过施加养分胁迫的方法，大大提高了拟南芥中的花青素含量，使得我们能充分利用拟南芥生长周期短、适于室内水培等优点，为花青素的提取提供了一种新的选择；用稀硫酸溶液能充分提取出拟南芥中的花青素，同时免除了茎叶中叶绿素的干扰；拟南芥培养及花青素提取工艺操作简单，耗费较少，无有害物质残留。CN107459504ACN107459504A权利要求书1/1页1.一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于该方法以拟南芥为提取材料，通过施加养分胁迫提高茎叶中的花青素含量，茎叶样品经液氮破碎，并用稀硫酸溶液提取，再通过阴离子交换树脂从而浓缩在甲醇中。2.根据权利要求1所述一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于具体步骤为：（1）拟南芥培养：播种后，将拟南芥先用全营养液培养4-6周，再转移至去离子水中培养，然后剪取茎叶样品，用作提取花青素；（2）花青素的粗提取：称取拟南芥茎叶，置于研钵中，加入液氮充分研磨；然后加入1-5mol/L的稀H2SO4溶液，用钵杵研匀后，再用去离子水将其全部洗入离心管中；静置后离心，将上清液用定量滤纸过滤，滤液收集在新的离心管中；（3）花青素的精制：向滤液中加入过量的CaCl2溶液去除硫酸根，混匀后静置，接着离心，将上清液用定量滤纸过滤，并收集在新的离心管中；然后将滤液通过阴离子交换树脂，并用甲醇洗脱；最后将洗脱液旋干，再用甲醇溶解，最后用氮气吹干，即得精制的花青素。3.根据权利要求2所述一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于所述拟南芥培养步骤中，转移至去离子水中的培养时间为1周。4.根据权利要求2所述一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于所述硫酸溶液与茎叶的体积质量比为100μL/g。5.根据权利要求2所述一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于所述花青素的粗提取步骤中，静置时间为2-48h，离心条件为4100g下5min。6.根据权利要求2所述一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于所述花青素的精制步骤中，静置时间为1h，离心条件为4100g下5min。7.根据权利要求2所述一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于所述花青素的精制步骤中阴离子交换树脂为Amberlite®IRA402chlorideform。8.根据权利要求2所述一种从水培拟南芥中提取花青素的方法，其特征在于所述花青素的精制步骤中旋干条件为40℃、50hPa。2CN107459504A说明书1/4页一种从水培拟南芥中提取花青素的方法技术领域[0001]本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及一种从水培拟南芥中提取花青素的方法。背景技术[0002]花青素是一类广泛存在于植物中的水溶性色素，作为一种重要的类黄酮物质，受到了食品、药物及保健产业的持续关注。因为在食品及药物的着色过程中，花青素作为无毒的天然色素，有着替代合成染料的潜在应用价值。另外，由于具有抗氧化和抗癌活性等有益人类健康的特性，花青素正被越来越多地被应用在保健品中。[0003]花青素广泛分布在植物的根、茎、叶、花和果实等器官中，是植物形态建成过程中或响应逆境而产生的一种次生代谢物质，在植物生长过程中起重要作用。紫甘蓝、蓝莓中的花青素含量比较高，是良好的花青素提取材料，相关的提取方法也有很多。而对模式植物-拟南芥的关注则很少，这是由于在正常生长条件下，拟南芥中只能合成少量的花青素，开发提取的价值不明显。[0004]拟南芥(Arabidopsisthaliana)与白菜、油菜、甘蓝等经济作物同属十字花科，其本身并无明显的经济价值。而由于拟南芥具有植株较小、生长周期短、结实多、基因组小等优良特性，使其成为了全球应用最广泛的模式植物。花青素生物合成受内外环境因素的影响较大，如:温度、光、糖、胁迫以及植物激素等都影响花青素的合成。因此，可以通过施加养分胁迫等逆境条件，使原本正常生长拟南芥幼苗产生大量的花青素。发