四川大学生物制药技术复习资料.docx

四川大学生物制药技术复习资料

第一篇：四川大学生物制药技术复习资料生物制药技术复习资料一、生物药物生产原料选择的主要原则。生物药物的特性及种类。主要原则：有效成分含量高，原料新鲜；来源丰富，易得；原料产地较近；杂技含量少；原料成本低；易提取。特性：（1）药理学特性：治疗的针对性强；药理学活性高；毒副作用小，营养价值高；生理副作用常有发生。（2）生产、制备中的特殊性：原料中的有效物质含量低；稳定性差；易腐败；注射用药有特殊要求。（3）检验上的特殊性：要有理化检验指标，和生物活性检验指标。分类：按药物化学本质和化学特性分类：（1）氨基酸及基衍生物类（2）多肽和蛋白质类（3）酶和辅酶类（4）核酸及基降解物和衍生物类（5）糖类（6）脂类（7）细胞生长因子类（8）生物制品类（9）小动物制剂（10）动物器官或组织制剂按原料来源分类：（1）人体组织（2）动物组织（3）植物组织（4）微生物（5）海洋生物来源的药物按生理功能和用途分类：（1）治疗药物（2）预防药物（3）诊断药物（4）其他二、生物药物提取分离制备方法的工艺过程。在对生物药物进行提取操作时，选择提取试剂需注意的问题。工艺流程：1、生物药物原料的选择、预处理与保存2、生物药物的提取：（1）生物组织与细胞破碎：磨切法，压力法，反复冻融法，超声波震荡破碎法，自溶法，酶溶法（2）选择合适的溶剂进行提取3、生物药物的分享纯化：（1）蛋白质类药物的分享纯化：沉淀法，亲和层析法，疏水层析法（2）核酸类药物的分离纯化：提取法，发酵法（3）糖类：沉淀法，离子交换层析法（4）脂类：沉淀法，吸附层析法，离子交换层析法（5）氨基酸类：沉淀法，吸附法，离子交换法试剂的选择：1、对所需要提取的活性成分溶出度较高，对杂技较低。2、不破坏活性成分。3、利于后续预处理。4、对环境影响较小，有利于回收和处理。5、对设备要求不高。6、成本较低。7、对人体无害三、基因工程制药的主要工艺过程获得目的基因，组建重组质粒，构建基因工程菌（或细胞），培养工程菌，产物的分离纯化，质量控制，产品检验包装四、目的基因及其获取方法和要求，构建cDNA文库法分离目的基因主要步骤。获取方法：构建基因文库法，构建cDNA文库法，DNA的化学合成法，PCR法，反转录法要求：不含多余干扰成分，纯度高，片段大小适合重组操作主要步骤：选择分享表达目的基因的组织或细胞，制备总体RNA和mRNA-cDNA第一链和第二链的酶促合成和分级分离，与各种接头连接并克隆到载体，包装及转染宿主菌，在培养基上生长繁殖成重组菌落或噬菌斑，筛选出含有目的基因的克隆，cDNA文库的质量检测及保存五、基因工程菌的培养方式，连续式发酵对基因工程产品大规模生产的优势。影响基因工程菌发酵的主要因素有哪些？如何进行基因工程菌发酵条件的研究。培养方式：分批培养，补料分批培养，连续培养，透析培养，固定化培养/5连续培养优势：1、可为微生物提供恒定的生长环境，控制其比生长速率，2、可实现将工程菌的生长阶段和基因表达阶段分开进行两阶段连续培养，并可通过优化速率水平，稀释率和比生长速率这三个参数，保证在第一阶段培养时质粒稳定，在第二阶段获得最高表达水平或最大产率。影响基因工程菌发酵的主要因素：1、培养基的影响。2、接种量的影响。3、温度的影响。4、溶解氧的影响。5、诱导时机的影响。6、诱导表达程序的影响。7、pH的影响研究内容：1、选择宿主菌：研究不同宿主菌对外源基因表达的影响2、基因工程菌的生长曲线测定3发酵条件对外源基因表达的影响4、重组质粒稳定性研究六、以包涵体表达形式的基因工程药物的分离纯化过程和方法，分离纯化出具有活性的蛋白质的一般步骤及其操作要点。如何进行分离纯化的研究。过程方法及操作要点：1、菌体细胞的收集与破碎（既要使菌体破碎率尽可能高，又要保持包涵体的完整性）2、包涵体的分离，洗涤与溶解（通过离心法使包涵体与上清液中的碎片及杂质蛋白分开。包涵体的洗涤基本原则：杂质去除率尽可能高而不溶解包涵体中的目的蛋白。溶解包涵体的试剂选择基本原则：（1）对目的蛋白的溶解性强，选择性好，（2）保护蛋白质的生物活性（3）安全性（4）适合后续各种纯化操作（5）价廉）3、变性蛋白的纯化（对包涵体抽提物采用柱层析、凝胶过滤、离子交换层析和HPLC等方法进一步分离纯化）4、蛋白质的复性（恢复可溶性和生物活性，就考虑影响因素：蛋白质尝试，杂质含量，重折叠速度，氧化还原剂用量和比例，重折叠配体的掺入，温度，pH和离子强度等）分离纯化研究：1、破菌研究：破菌方法及其条件研究，镜检评价其破碎效果，原则是使菌体破碎率尽可能高，又要保持包涵体的完整性2、包涵体的分离和洗涤研究：（1）分离包涵体时的离心力和时间的考察，（2）洗涤剂及其他浓度，用量研究（3）洗涤时间和温度研究3、目的蛋白的变性（抽提）研究：（1）变