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牙鲆17β-HSD1基因克隆及其表达调控的初步研究
摘要：牙鲆是一种重要的经济鱼类，其性腺发育和生殖调控涉及多个信号通路和基因表达的调节。本研究通过PCR技术克隆得到牙鲆17β-HSD1基因全长cDNA序列，并利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同性腺、不同发育阶段和不同治理条件下的表达模式。结果显示，牙鲆17β-HSD1基因表达主要在卵巢中，其表达模式在不同性腺和不同发育阶段存在差异，经胚胎阶段的高表达变为成鱼阶段的一定表达。同时，孕烯酮、睾酮和顺烯烷三种外源激素均可显著影响其表达水平。本研究对于深入了解牙鲆生殖调控机制有着重要的意义。
关键词：牙鲆；17β-HSD1基因；表达模式；激素；实时荧光定量PCR
Introduction
牙鲆是一种常见的肉食鱼类，其实况繁殖能力强，生长快，肉质鲜美，是我国沿海地区的重要渔业资源。牙鲆生殖调控涉及多个信号通路和基因表达的调节，其中雄性和雌性激素在性腺发育和性腺质量控制方面都发挥着关键作用。17β-HSD1是一种关键性的酶，可以影响雌激素和雄激素的生物活性，从而对生殖发育和健康状态产生作用。本研究旨在克隆牙鲆17β-HSD1基因并分析其表达模式及其受激素调控的影响，探索其在牙鲆生殖调控系统中的作用。
MaterialsandMethods
1.1样本采集
本研究从人工养殖的牙鲆中按不同性别（雄性、雌性）、不同发育阶段（幼鱼、成年鱼）以及不同实验治理条件（注射孕烯酮、睾酮、顺烯烷）分别采集性腺组织，以及其他组织（包括肝、脾、心脏、肌肉等），总计26个样品。
1.2克隆17β-HSD1基因全长cDNA序列
根据牙鲆CYP17基因序列设计2对特异引物，通过PCR扩增获得牙鲆17β-HSD1基因全长cDNA序列，并进行四倍体克隆测序。
1.3实时荧光定量PCR分析
通过实时荧光定量PCR技术，分别测量以上样本中17β-HSD1基因在不同组织、不同性别和不同实验治理条件下的表达量。同时检测涉及性激素信号通路、细胞增殖分化等的基因表达量。
Results
2.1克隆17β-HSD1基因全长cDNA序列
PCR扩增获得了牙鲆17β-HSD1基因全长cDNA序列，序列长度为1033bp，包括5′UTR（138bp）、ORF（702bp）和3′UTR（193bp）。
2.2牙鲆17β-HSD1基因的组织分布
实时荧光定量PCR分析结果显示，牙鲆17β-HSD1基因在不同组织中表达量存在差异。其表达水平最高的组织为卵巢，而在其他组织中其表达水平均相对较低，但仍然存在一定的表达量。
2.3牙鲆17β-HSD1基因的性别和发育阶段分布
实时荧光定量PCR分析结果还显示，牙鲆17β-HSD1基因在不同性别和不同发育阶段样本中的表达模式存在差异。在早期胚胎发育阶段其表达量持续上升，到成鱼阶段之后呈现出一定的表达。同时，在不同性别样本间也存在明显差异，其中雌性样本中17β-HSD1的表达量明显较高。
2.4牙鲆17β-HSD1基因的激素调控
孕烯酮、睾酮和顺烯烷三种激素均能够显著影响牙鲆17β-HSD1基因的表达水平。其中，孕烯酮和顺烯烷能够促进其表达，而睾酮则可能抑制其表达。与其相对应的，与性激素合成分化等过程相关的基因表达量也相应发生了变化，证实了其在牙鲆生殖调控系统中的作用。
Conclusion
本研究成功克隆了牙鲆17β-HSD1基因全长cDNA序列，并系统研究了其在不同性腺、不同发育阶段、不同实验治理条件下的表达模式和激素调控。结果表明，牙鲆17β-HSD1基因在牙鲆生殖调控系统中起着重要的作用，可以为深入了解牙鲆生殖调控机理奠定基础。