流式细胞术免疫标记简介.ppt

流式细胞术免疫标记应用简介上次流式细胞术讲座内容（概述）流式细胞仪可检测的细胞参数免疫标记技术FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧光（Fluorescence）信号流式细胞术免疫荧光标记的应用血液系统各型细胞免疫标志CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。
CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一，并随一定的分化过程表达上调
最近发现CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖细胞标志
结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育阶段的标志。
如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标志；
CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。
CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向的祖细胞。
T细胞及其亚群
T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、CD7+
未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。
在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。
胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞表面标志需经历一定的变化过程。进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能
CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），占T细胞总数的60%~70%；
CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc），20%~30%；
CD3+CD4+CD8+：1%~3%；
CD3+CD4-CD8-：1%~10%。
前三种表型细胞的TCR主要为TCRαβ，而CD4-CD8-T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免疫功能。
CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞（LGL／NK）的表面。
CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期和普通型T细胞白血病的主要分型标记。CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记，也是髓系白血病时最常见的伴随标记。CD45则是白细胞的共同标记抗体
CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表达。末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期T细胞白血病的诊断有重要价值。
80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK细胞。B细胞标记（3）未成熟（早期）B细胞（immatureBcell）：CD9、CD10消失，出现SIgM、CD22。CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、CDw76相继出现。

（4）成熟B细胞（matureBcell）：SIgM和IgD同时表达，并出现CR、FcR和丝裂原受体，上述B细胞抗原继续存在。
（5）活化B细胞（activatedBcell）：成熟B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞，继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相关抗原如CD25、CD26、CD30、CD69、CD70、CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少，分泌型Ig逐渐增加。
（6）浆细胞（plasmacell）：激活B细胞进一步分化成为产生抗体的浆细胞，这时获得PC-1、PCA-1和CD138浆细胞特异抗原，CD85表达增加，CD38抗原再出现。而SIg和上述B抗原消失。CD79仍可存在于胞质中。
B细胞上的CD抗原分为：
①B细胞限制性（特异性）抗原：CD19、CD20、CD21、CD22、CD77和CD79，它们的表达只限于B细胞上，在鉴别细胞系上是十分重要的标志。
②B细胞相关性抗原：CD5、CD9、CD10、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CDw78、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85、CD86、CD124和CD139。
B细胞表面的受体SIg，是B细胞特异性识别抗原的受体，也是B细胞重要的特征标志。
CD19、CD20、CD21、CD22和CD24都是B细胞白血病和淋巴瘤最常用的标记抗体。
对中国人而言，CD19是特异性和敏感性最高的。
CD19是一种早期的、谱系特异的泛B细胞表面抗原，从最早期B细胞前体细胞阶段即表达，持续存在直至B细胞终末阶段
外周血T细胞、单核细胞、粒细胞和血小板表面不表达CD19。髓系细胞标记3.髓系标记从髓系祖细胞→终末分化的成熟细胞（粒细胞、单核细胞、