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第六章发酵过程控制1.过程控制的重要性2.发酵过程控制的一般步骤3.参数检测参数按获取方式可分为两类: 直接参数:如T、pH、罐压、空气流量、搅拌转速、溶氧浓度等 间接参数:将直接参数通过公式计算获得的参数,如摄氧率(γ)、呼吸强度(QO2)、比生长速率(μ)、体积溶氧系数(KLa)、呼吸商(RQ)等。离线测量:基质(糖、脂类、无机盐等)、前体和代谢产物(抗生素、酶、有机酸、氨基酸等) 在线测量:如T、pH、DO、溶解CO2、尾气CO2、黏度、搅拌转速等伴随发酵的进行而产生的热量叫发酵热;发酵热的产生引起发酵液温度变化。在发酵过程中,某些因素导致热的产生,另外一些因素又导致热量散失。 产热>散热净热量堆积发酵液的温度上升; 相反,产热小于耗热,温度下降。生物热(Q生物)具有时间性; 具有生物特异性; 与营养有关;搅拌热(Q搅拌)蒸发热:空气经发酵液时,发酵液中有部分水汽化,变成水蒸气,随空气一起排出罐外,这部分水汽化时带走的热量用Q蒸发表示,假设进出口气体温度相同,则由通气带走的热量为: Q蒸发=G(I出-I进),G:空气流量;I:气体热焓;散热的情况:温度影响微生物生长的机理 (1)影响酶活性。 (2)影响细胞膜的流动性。 (3)影响物质的溶解度。嗜冷菌适应于0~26℃生长,嗜温菌适应于15~43℃生长, 嗜热菌适应于37~65℃生长,嗜高温菌适应于65℃上生长(1)有最适宜温度范围。 (2)高温使蛋白质凝固。耐热能力与pH值有关。不能低温合成蛋白质。 低温微生物可合成冷休克蛋白。 微生物受高温的伤害比低温的伤害大,低于最低温度,微生物代谢受到很大抑制,并不马上死亡。这就是菌种保藏的原理。(1)影响发酵过程中各种反应速率,从而影响微生物的生长代谢与产物生成。 (2)改变发酵液的物理性质,间接影响菌的生物合成。 (3)影响生物合成方向。 (4)温度对菌的调节机制关系密切。 (5)影响酶系组成及酶的特性。5.温度的控制前期菌量少,取稍高的温度,使菌生长迅速; 中期菌量已达到合成产物的最适量,发酵需要延长中期,从而提高产量,因此温度要稍低一些; 后期产物合成能力降低,延长发酵周期没有必要,就又提高温度,刺激产物合成。2)根据培养条件选择菌生长快,维持在较高温度时间要短些;菌生长慢,维持较高温度时间可长些。培养条件适宜,如营养丰富,通气能满足,那么前期温度可髙些,以利于菌的生长。 总的来说,温度的选择根据菌种生长阶段及培养条件综合考虑。要通过反复实践来定出最适温度。第二节pH对发酵的影响及其控制(1)C/N过高,或中间补糖过多,溶氧不足,致使有机酸积累,pH下降; (2)消泡剂加得过多:脂肪酸增加; (3)生理酸性盐的利用; (4)酸性产物形成:如有机酸发酵。(1)C/N过低(N源过多),氨基氮(NH4+)释放; (2)中间补料中氨水或尿素等碱性物质加入过多; (3)生理碱性盐的利用; (4)碱性产物形成。二、发酵过程中pH的变化规律1.pH对微生物生长的影响2.pH对产物合成的影响pH影响代谢方向:pH不同,往往引起菌体代谢过程不同,使代谢产物的质量和比例发生改变。 e.g.黑曲霉发酵:pH2~3,柠檬酸;pH接近中性,草酸 酵母菌发酵:pH4.5~5.0,酒精;pH8.0,酒精、醋酸和甘油 谷氨酸发酵:pH7.0~8.0,谷氨酸;pH5.0~5.8,谷酰胺和N-乙酰谷酰胺影响酶的活性。 影响菌体细胞膜电荷状况,引起膜的渗透性的变化,因而影响菌体对营养的吸收和代谢产物的形成。 影响培养基某些重要的营养物质和中间代谢产物的离解,从而影响微生物对这些物质的利用。 影响代谢过程的不同,使代谢产物的质量和比例发生变化。四、最适pH的选择调节好基础料的pH。 在基础料中加入维持pH的物质,如CaCO3,或具有缓冲能力的试剂,如磷酸缓冲液等。 通过补料调节pH。在发酵过程中根据糖氮消耗需要进行补料。在补料与调pH没有矛盾时采用补料调pH,如 (1)调节补糖速率,调节空气流量来调节pH (2)当NH2-N低,pH低时补氨水;当NH2-N低,pH高时补(NH4)2SO4 当补料与调pH发生矛盾时,加酸碱调pH改变搅拌转速或通气量,以改变溶解氧浓度,控制有机酸的积累量及其代谢速度; 改变温度,以控制微生物代谢速度; 改变罐压及通气量,降低CO2的溶解量; 改变加油或加糖量等,调节有机酸的积累量;1、泡沫的产生、性质及变化 形成条件: 气-液两相共存; 表面张力大的物质存在;一种是发酵液液面上的泡沫,气相所占的比例特别大,与液体有较明显的界限,如发酵前期的泡沫; 另一种是发酵液中的泡沫,又称流态泡沫,分散在发酵液中,比较稳定,与液体之间无明显的界限。发酵过程泡沫产生的原因(2)培养基配比与原料组成(3)菌种、种子质量和接种量(4)灭菌质量整个发酵