槲皮素在鉴别中蜂蜜和意蜂蜜中的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114858948A(43)申请公布日2022.08.05(21)申请号202210646486.0(22)申请日2022.06.08(71)申请人中国农业科学院蜜蜂研究所地址100093北京市海淀区香山北沟1号(72)发明人赵柳微赵彤李强强薛晓锋吴黎明王妙齐素贞(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师商秀玲(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/34(2006.01)G01N30/72(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称槲皮素在鉴别中蜂蜜和意蜂蜜中的应用(57)摘要本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及槲皮素在鉴别中蜂蜜和意蜂蜜中的应用。本发明发现槲皮素在中蜂蜜与意蜂蜜中的含量差异特征，经验证确认槲皮素可作为中蜂蜜与意蜂蜜区分鉴别的特征性标志物，用于中蜂蜜和意蜂蜜的鉴定以及掺假中蜂蜜的检出。本发明提供的中蜂蜜和意蜂蜜的鉴别方法具有操作简单、高效、检测时间短等特点，具有较好的推广应用价值。CN114858948ACN114858948A权利要求书1/1页1.槲皮素在作为鉴别中蜂蜜和意蜂蜜的特征性标志物的应用。2.槲皮素在鉴别中蜂蜜和意蜂蜜中的应用。3.槲皮素在检测中蜂蜜或意蜂蜜真实性中的应用。4.一种中蜂蜜和意蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，以槲皮素作为特征性标志物检测蜂蜜样品，若蜂蜜样品中槲皮素的含量≥0.5mg/kg，则判定所述蜂蜜样品为中蜂蜜；若蜂蜜样品中槲皮素的含量＜0.5mg/kg，则判定所述蜂蜜样品为意蜂蜜或为掺假中蜂蜜。5.根据权利要求4所述的中蜂蜜和意蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，采用LC‑MS/MS检测所述蜂蜜样品。6.根据权利要求5所述的中蜂蜜和意蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，所述LC‑MS/MS检测的液相条件为：采用C18色谱柱，以0.01％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B；采用梯度洗脱程序分离：0～1min，5％流动相B；1～2min，5～35％流动相B；2～3min，35～50％流动相B；3～5min，50～75％流动相B；5～5.1min，75～100％流动相B，5.1～7min，100％流动相B；7～7.1min，100～5％流动相B；7.1～10min，5％流动相B。7.根据权利要求6所述的中蜂蜜和意蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，柱温为39～41℃，和/或，流动相的流速为0.25～0.4mL/min。8.根据权利要求5所述的中蜂蜜和意蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，所述LC‑MS/MS检测为超高效液相色谱‑三重四级杆质谱检测。9.根据权利要求6～8任一项所述的中蜂蜜和意蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，所述LC‑MS/MS检测的质谱条件如下：扫描模式：负离子模式；干燥气温度：325℃；干燥气流速：10L/min；雾化器压力：35psi；鞘气温度：370℃；鞘气流速：11L/min。10.根据权利要求5或6所述的中蜂蜜和意蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，在LC‑MS/MS检测前，还包括对蜂蜜样品进行预处理的步骤，所述预处理包括：将所述蜂蜜样品加水溶解后，以50‑70kHz功率超声5‑15min，经固液分离得到蜂蜜样品溶液，将所述蜂蜜样品溶液过固相萃取柱，待液体全部流出后，用水淋洗固相萃取柱，抽干，用甲醇洗脱并收集洗脱液，干燥后再用甲醇复溶。2CN114858948A说明书1/7页槲皮素在鉴别中蜂蜜和意蜂蜜中的应用技术领域[0001]本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及槲皮素在鉴别中蜂蜜和意蜂蜜中的应用。背景技术[0002]意蜂蜜是由意大利蜜蜂(Apismellifera)所产的蜂蜜。中蜂蜜是中华蜜蜂(Apiscerana)所产的蜂蜜，也称“土蜂蜜”，其营养和保健功效深受消费者信赖，然而因中蜂蜜的产量较低，目前中国市场上的中蜂蜜价格通常是意蜂蜜的三到五倍。以意蜂蜜冒充中蜂蜜或将意蜂蜜掺入中蜂蜜中形成的掺假蜂蜜给中蜂养殖者以及相关蜂产品企业造成了严重损失，同时也会引发消费者的信任危机。因此，开发能够有效鉴别中蜂蜜和意蜂蜜的方法是当前蜂产品行业亟待解决的问题。发明内容[0003]本发明的目的是提供槲皮素在鉴别中蜂蜜和意蜂蜜中的应用。[0004]为实现上述目的，本发明利用超高效液相色谱‑三重四级杆串联质谱(UPLC‑QqQ‑MS/MS)对大量的中蜂蜜和意蜂蜜样品进行了检测分析，发现了能够用于区分鉴别中蜂蜜和意蜂蜜的特征性物质峰。经比对分析，该特征峰对应的化合物为槲皮素。进一步通过不同年份、不同来源的中蜂蜜和意蜂蜜的验证，确认了槲皮素在中蜂蜜中的含量明显高于意蜂蜜，且该特征在不同年份、不同来源的中蜂蜜和意