马尾松组培苗瓶外生根方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103461121103461121B(45)授权公告日2014.11.26(21)申请号201310396794.3(22)申请日2013.09.04(73)专利权人广西壮族自治区林业科学研究院地址530002广西壮族自治区南宁市邕武路23号(72)发明人姚瑞玲袁铁象吴幼媚蔡玲(74)专利代理机构广西南宁汇博专利代理有限公司45114代理人邹超贤(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)审查员胡可权利要求书1页权利要求书1页说明书5页说明书5页(54)发明名称马尾松组培苗瓶外生根方法(57)摘要本发明马尾松组培苗瓶外生根方法，取带0.5cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体在培养基Ⅰ中诱导丛芽；将诱导丛芽在培养基Ⅱ中伸长培养，单个切下顶芽接种到培养基Ⅲ中增殖获得继代芽Ⅰ；将继代芽Ⅰ重复伸长，单个切下继代芽Ⅰ并分成顶芽和芽段后在继代增殖培养基Ⅲ中继续增殖获得继代芽Ⅱ，将继代芽Ⅱ再重复伸长与增殖获得新的增殖继代芽；将单个切下高2.5-3.5cm的继代芽移植育苗杯中瓶外生根，然后移栽苗圃培育获得组培瓶外生根苗。本方法简化试管苗生产程序，降低生产成本，提高生产效率，生根处理25-30d，瓶外生根率达92-98%，且根系质量较高，移栽成活率达90-95%，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。CN103461121BCN103462BCN103461121B权利要求书1/1页1.一种马尾松组培苗瓶外生根方法，其特征在于：包括无菌培养体系建立、继代增殖扩繁、组培苗瓶外生根、移栽苗圃培育，获得马尾松组培瓶外生根苗，其操作步骤如下：（1）无菌培养体系建立：将马尾松种子消毒后，在无菌条件下进行种子萌发，然后截取带0.5cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体，在培养基Ⅰ中进行丛芽诱导获得马尾松丛生芽培养体系；（2）继代增殖扩繁：将诱导出的丛生芽在培养基Ⅱ中进行伸长培养后，单个切下伸长芽的顶芽接种到培养基Ⅲ中进行增殖，获得继代芽Ⅰ；将继代芽Ⅰ重复进行伸长培养，单个切下伸长的继代芽Ⅰ并分成顶芽和芽段后在继代增殖培养基Ⅲ中继续增殖获得继代芽Ⅱ，将继代芽Ⅱ再重复伸长与增殖过程，获得新的增殖继代芽；重复循环继代芽伸长与增殖的步骤，直至获得大量足够生根培养的继代芽；（3）组培苗瓶外生根：将单个切下生长健壮、高2.5-3.5cm的继代芽，用含有0.2-0.6mg/LABT6的GD，或者是含有50-100mg/L的吲哚丁酸IBA、25-50mg/L的α-萘乙酸NAA的DCR或SH液体培养基的促根剂，进行30-60min浸泡处理或加入滑石粉成糊状进行蘸根处理后，移植于装有瓶外生根基质的育苗杯中，种植后尽快用0.1%多菌灵溶液淋定根水，并覆盖薄膜保湿；组培苗瓶外生根种植后10d内，控制湿度90-100%；移植10-15d，揭开塑料薄膜两端，控制湿度70-80%；移植后15-20d，揭开塑料薄膜，控制湿度55-65%；移植后20-25d，当苗木出现新的长势时，隔天以0.1%的KH2PO4加入0.05%尿素浇施马尾松苗，3-5次隔天浇施以后，逐步将KH2PO4的浓度增加到0.5%；（4）移栽苗圃：待苗木长势稳定时，移栽到苗圃，并按常规方法进行水肥及病虫害等育苗管理；所述的瓶外生根基质其原料组分和体积配比为：泥炭土∶蛭石∶珍珠岩=1∶1∶1；所述的培养基Ⅰ其原料组分和质含量为：6-BA2.5-4.0mg·L-1、NAA0.05-0.1mg·L-1、蔗糖30000mg·L-1、酸水解酪蛋白500mg·L-1和改良MS培养基；所述的培养基Ⅱ其原料组分和质含量为：NAA0.25-0.4mg·L-1或活性炭3000-5000mg·L-1、蔗糖30000mg·L-1和改良MS培养基；所述的培养基Ⅲ其原料组分和质含量为：6-BA1.0-3.0mg·L-1、KT0.5-1.0mg·L-1、NAA0-0.3mg·L-1、蔗糖30000mg·L-1和改良MS培养基；-1-1所述的改良MS培养基的基本组分和质含量为：KNO31650mg·L；NH4NO3600mg·L；-1-1-1CaCl2·2H2O260mg·L；MgSO4·7H2O370mg·L；Ca(NO3)2·4H2O400mg·L；KH2PO4170-1-1-1-1mg·L；MnSO4·H2O22.3mg·L；ZnSO4·7H2O8.6mg·L；CuSO4·5H2O0.025mg·L；H3BO3-1-1-1-16.2mg·L；Na2MoO4·2H2O0.025mg·L；KI0.83mg·L；CoCl2·6H2O0.025mg·L；-1-1-1-1维生素B11.0mg·L；维生素B60.5mg·L；烟酸0.5mg·L；甘氨酸2.0m